细胞计数法
细胞分裂指数法
接种存活率和克隆形成率法
流式细胞仪检测细胞周期时相和DNA合成法
实验方法原理 |
细胞计数法:细胞计数法是测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。一般过程为接种21 孔/24 孔板细胞(如用培养瓶时则21 瓶)。分7 组,每组3 孔(或瓶),培养一周,期间逐日检测一组,计数。把7天中的细胞数值绘成图,即为细胞生长曲线。 |
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实验材料 | 细胞 |
试剂、试剂盒 | 胰蛋白酶 |
仪器、耗材 | 培养瓶 恒温箱 试管 细胞自动计数器 |
实验步骤 |
1. 悬液制备
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注意事项 |
1. 计数法简便易行,但不够精确,约有20 %~30 %的误差。为提高准确性,每孔也应计算2~3 次,则总和每组计算总次数达6 次~12 次,均值可能更为精确。
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其他 |
细胞增殖生长力是判定细胞活力的重要指标,有多种显示方法,除实验的细胞计数法之外,还可以进行细胞分裂指数的测定。细胞分裂是细胞增殖的方式,能比较确切地反映细胞增殖度。细胞分指数是指被测细胞群每 1000 个细胞中的分裂细胞数(分裂细胞/1000),用以表示细胞增殖旺盛程度。因此在检测中需观察和记录群体中 1000 个细胞中的细胞分裂相数。 细胞被制成分散的悬液后,以低密度(2~5 个细胞/cm2)被接种到底物上,贴壁并能存活生长形成细胞小群(克隆)的细胞百分数值称接种存活率,用以表示细胞群的活力。由于检测接种存活率时是借观察克隆(通常为 16~50 个细胞)形成情况,又因每个克隆都来自一个细胞,因此也称克隆形成率。细胞接种存活率与细胞活力成正比。 近年流式光度仪的发展已成为检测细胞增殖周期主要手段,可进行多项柱测,如细胞周期时相、DNA 合成强度、持续时间等,效果极好,已取代了应用同位素等繁琐方法。培养细胞是非常适用于做流式细胞仪检测的对象,程序简单、怏速、效果准确。流式细胞仪除能检测细胞周期时相变化和反应 DNA 合成情况外,也可借以了解染色体倍性;另外尚可结合荧光免疫法对细胞膜进行分析等。 来源《组织培养和分子细胞学技术》(北京出版社) 展开 |