（二）使用液
单去污剂裂解液（50mmol/L Tris•HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％SDS，1mmol/L PMSF）：
1mol/L Tris•HCl（pH8.0）2.5ml
NaCl 0.438g
10%SDS 0.5ml
200mmol/L PMSF 2.5ml
蒸馏水至 50ml
若检测磷酸化蛋白，需加入100ul 5mol/L NaF和500ul 100mmol/L激活矾酸钠，混匀后， 4℃保存。
G250考马斯亮蓝溶液（染胶专用）
考马斯亮蓝G250： 0.063g
甲醇： 15ml
乙酸： 5ml
蒸馏水至 50ml
溶解后，4℃保存。
分离胶（两块胶，10ml）
8％ 10% 12% 15%
超纯水 4.6ml 4.0ml 3.3ml 2.3ml
30％Acr/Bic（29：1） 2.7ml 3.3ml 4.0ml 5.0ml
1.5 mol/L Tris•HCl（pH8.8） 2.5ml 2.5ml 2.5ml 2.5ml
10％SDS 100ml 100ml 100ml 100ml
10%AP（过硫酸胺） 100ml 100ml 100ml 100ml
TEMED 4ml 4ml 4ml 4ml
加 TEMED后，立即混匀即可灌胶。
4％浓缩胶（两块胶，5ml）
超纯水 2.1ml
30％Acr/Bic（29：1） 0.5ml
0.5 mol/L Tris•HCl（pH6.8） 0.38ml
10％SDS 30ml
10%AP（过硫酸胺） 30ml
TEMED 3ml
加 TEMED后，立即混匀即可灌胶。
还原型5XSDS上样缓冲液（0.25mol/L Tris/HCl pH6.8，0.5mol/L二硫叔糖醇，10％ SDS，0.5％溴酚蓝，50％甘油）
0.5 mol/L Tris•HCl（pH6.8） 0.5ml
二硫叔糖醇（DTT，MW154.5） 0.078g
SDS 0.1g
10%溴酚蓝 0.05ml
甘油 0.5ml
混匀后，分装于1.5ml离心管中，4℃保存。
电泳液缓冲液（25mmol/L Tris，0.25mol/L甘氨酸，0.1％ SDS）
Tris（MW121.14） 1.515g
甘氨酸（MW75.07） 9.385g
SDS 0.5g
蒸馏水至 500ml
溶解后室温保存，次溶液可重复使用2～3 次。
转移缓冲液（48mmol/L Tris，39mmol/L甘氨酸，0.01％ SDS，20％甲醇）
甘氨酸（MW75.07） 2.9g
Tris（MW121.14） 5.8g
SDS 0.1g
甲醇 200ml
蒸馏水至 1000ml
溶解后室温保存，次溶液可重复使用2～3次。
10X丽春红染液
丽春红S 0.2g
三氯乙酸 3g
磺基水杨酸 3g
蒸馏水至 10ml
溶解后，避光4℃保存，使用时将其稀释10倍，稀释液勿回收。
TBS缓冲液（10mmol/L Tris/HCl pH7.5, 150mmol/L NaCl）
1 mol/ LTris•HCl（pH7.5） 10ml
NaCl 8.8g
蒸馏水至 1000ml
TBST缓冲液（含 0.05％Tween20的TBS缓冲液）
20％Tween20 1ml
TBS 400ml
混匀后即可使用，最好现用现配。
封闭液（含5％脱脂奶粉的TBST缓冲液）
脱脂奶粉（国产，安怡牌） 2.5g
TBST 50ml
溶解后4℃保存。使用时，恢复室温，用量以盖过膜面即可，一次性使用。
洗脱抗体缓冲液（100mmol/L 2-Mercaptoethanol，2％SDS，62.5m mol/L Tris•HCl pH6.8）
14.4 mol/L 2- Mercaptoethanol(β-巯基乙醇) 700 ml （通风厨里加）
SDS 2g
0.5mol/L Tris•HCl（pH6.8） 12.5ml
超纯水至 100ml
配制时，在通风厨内进行。 4℃保存。可重复使用1次。
ECL化学发光试剂
promage产品，分A和B两种试剂，使用时等体积混合，每张膜使用混合液体积1ml。
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