用于检测和定量分析极性细胞代谢物的一种新颖...（四）

图6. 使用碱性（左表）和酸性（右表）流动相在H-S和H-G组织样本中所检出化合物的浓度计算结果总合

对在碱性和酸性流动相分离中所检出的H-S和H-G组织样本中的每种化合物均计算了分析物浓度。通过比较红色比目鱼肌（S）和腓肠肌（G）组织样本中的代谢物浓度证实了在其相对浓度方面存在显著差异。

3. 通过联用Synapt G2的UPLC对HILIC LC-MS方法的标准品和细胞萃取物进行定量分析

最近开发的用于Synapt G2的QuanTof技术^[1]以及MS^E数据采集技术的应用实现了一种通用型UPLC-MS方法的开发；这种方法可在一次运行分析得到提供所有物质的定量和定性信息，既包括母离子信息也包括产物离子的信息。对于此项测定而言，系列稀释标准品以及H-S和H-G样本的数据都进行了采集（图7），所有的数据处理工作在采集完成后进行。

图7. 全扫描色谱图比较。通过UPLC-Synapt G2获取的S和G细胞萃取物的数据。

图8. 目标化合物的鉴定和定量结果

首先，自动筛选细胞萃取物中是否存在目标化合物。离子的鉴定和确认通过一个单一处理步骤使用Posit±veTM软件包得出母离子和子离子的准确质量（2mDa窗口）而实现（图8）。

该数据表明与Xevo TQ分析结果具有良好的一致性。图8给出了一个示例，化合物L-脯氨酸在细胞萃取物中被明确鉴别出来，并在4个数量级中表现出线性的动态范围响应，RMS质量误差为0.57mDa。

结论

使用新型BEH Amide酰胺柱可开发出一种用于分离极性组织细胞代谢物的HILIC LC-MS方法，总运行时间不到15分钟。

同时采用Xevo TQ和Synapt G2 HDMS对红色和白色的肌肉组织萃取物进行定量分析，可明显区分出其主要代谢物（比如AMP、ADP和ATP、以及瓜氨酸）的显著不同。

QuanTof技术实现了定性和定量试验能够在Synapt G2上同时进行。

参考文献

1. Wildgoose J．整合了基于ADC新颖检测技术的高效、几何折叠型OA-Tof 质量分析仪．第18届国际质谱大会（IMSC）所提交的公告，德国不来梅，2009年。