甲基化特异性PCR

实验方法原理 MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因 组DNA，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳，凝胶扫描观察分析结果。

实验材料 DNA

试剂、试剂盒 亚硫酸氢钠氢醌石蜡油乙醇

仪器、耗材 水浴锅PCR仪

实验步骤

1.  在50 μl 体系中，DNA（2~5 μg）经NaOH（终浓度值0.2 mol/L）在37℃变性10 Min。

2.  对于ng级别的人基因组DNA，在进行修饰前加入2μg蛙鱼精DNA为载体。

3.  加入30 μl 刚配制好的10 mmo/L 氢醌与520/1的40.5%亚硫酸氢钠混匀。

4.  然后用石蜡油隔绝空气的条件下，避光在50%温育16 h。

5.  修饰后的DNA过WizerdDNA纯化柱，用50/1 L 水洗脱。

6.  室温下用NaOH（终浓度为0.3 mol/L）修饰5 min，之后用乙醇沉淀。

7.  DNA溶于20 μl 水中，立即使用或在-20℃保存。