实验材料 毒株标准血清
试剂、试剂盒 牛血清Hanks 氏液琼脂糖
仪器、耗材 水浴锅24孔板孵箱
实验步骤
一、试验目的
血清分型。
二、实验材料准备
1. 标本
出血热恢复期病人血清
2. 材料
(1) 毒株 汉滩病毒标准株 76-118,汉城病毒标准株 Seoul;
(2)标准血清 兔抗汉滩病毒、汉城病毒血清;
(3)空斑减少中和试验常用试剂。
三、步骤
1. 将待检血清用牛血清Hanks 氏液稀释成1:10,56℃灭活30分钟;
2. 进一步2倍稀释血清成1:20、1:40、1:80……,对照血清1:10稀释;
3. 稀释两种病毒(在冰浴中进行)至含200 pfu/ml;
4. 各连续稀释度血清分别与200 pfu/ml的两种病毒液等量混合(各0.3 ml),置37℃中作用1小时(每15分钟振荡一次);
5. 吸出各细胞培养孔中维持液;
6. 接种长满单层的Vero-E6细胞(24孔板),每孔接种血清病毒混合液、标准血清对照及两种病毒对照 ,每稀释度两孔,100 ul/孔。37℃吸附1小时,每隔15分钟摇动一次;
7. 加第一层琼脂糖覆盖液(需冷置42℃左右),每孔1 ml,室温下待凝固,细胞面朝上,置37℃5%CO2孵箱培养7-9天;