（五）免疫的具体方法
1、直接法免疫血清的制备
取体重2～3Kg的雄鸡1只，免疫前采血8～10mL，测其正常抗体。静脉注射新城疫弱毒新鲜尿囊液病毒2mL，同时腹腔注射8mL，2～4d后同法再免疫一次。第二次免疫后七天试血，血清凝集价在1︰320以上为合格即可全采血；如果不合格，可在第二次免疫后10d左右，用同法再免疫一次，一般都可获得高效价的免疫血清。制备抗病血血清时。抗原量要大，间隔日期要短。
2、免疫球蛋白抗血清制备方法
此法用于制备间接法抗抗体。因抗原为可溶性，故多需加佐剂。
（1）淋巴结注射法
1）选择体重2～3Kg的健康雄性家兔（最好 2只以上），编号；
2）在家兔两后脚掌共注射活卡介苗，50mg（约0.6mL．每只足庶部皮下0.1mL，皮内0.2mL）。7～10d后，鼠或国窝处淋巴结肿大如黄豆或蚕豆大小；
3）用二指固定肿大之淋巴结，两侧淋巴结各注射加有完全佐剂的抗原o．5mL，共1mL。事先将抗原稀释为
5～10mg/ml，在免疫前一日加入青、链霉素，使青、链霉素的浓度分别为1000U/mL和1000mg／mL。4℃过夜，次日取出与佐剂混合成乳剂。许多单位用两个注射器分别吸取佐剂与抗原，中间用细胶管连接，相互推进若干次，达到乳化目的；
4）10～14d后，于两侧淋巴结各注射加有完全佐剂的抗原0.25～0.5mL（这一次也可以省略）；
5）7d后，于两侧淋巴结各注射加有不完全佐剂的抗原0.25～0.5mL；
6）试血：第三次免疫后7～10d，耳静脉取少量血，分离血清，用双扩散法，中间孔加抗原（1mg/mL），周围孔加不同稀释度的待检抗血清，37℃、
24h，观察结果，效价在1︰16以上，或者中间孔加抗血清，周围孔加不同稀释倍数的抗原。效价达4000倍以上即可应用；
7）放血：效价合格后即可放血。放血前停食12h。动物仰卧固定，颈部剪毛消毒，切开皮肤lOcm，找到颈动脉，将颈动脉和迷走神经剥离。选择血管中段，用两止血钳夹住（约 5cm），切开，放血（2500g重家兔可放血lOOmL）；
8）分离血清：血液放于大试管、平皿或三角瓶中，凝固后，用铂耳或无菌滴管沿边缘剥离，先故37122h，再放4℃过夜，使血清充分析出。离心沉淀，鉴定合格，冰箱保存备用。
（2）皮下多点注射法
1）家兔两侧脚掌，各注加有完全佐剂的抗原0.5mL，共1mL；
2）7～10d后，脊柱两侧多点注射（颈椎附近二点，胸椎腰椎两侧四点，共六点），每点0.5mL；
3）7～10d 后再注一次加有不完全佐剂的抗原，每点0.5mL；
4）7～10d后试血，合格者放血；不合格，每周用加不完全佐剂的抗原加强免疫一次，共两周，再试血。
（六）效价测定
最后一次免疫以后10d左右，进行试血，对细菌等颗粒性抗原的凝集素要求效价在1︰3200以上，对蛋白质等可溶性抗原的沉淀素（如抗IgG血清等）采用环状沉淀试验，要求效价（稀释抗原）在1︰4000以上；而用双扩散法，稀释抗体，当抗原浓度1.0mg/mL时，抗体效价在1︰16～1︰32以上为合格。然后，就可以把动物的血液在无菌条件下放出，待凝固后，析出的淡黄色液体，就为制备好的免疫血清。
抗体大部分以蛋白质的形式存在于血清中，如免疫球蛋白IgG主要存在r球蛋白范围内。
四、蛋白质盐析法的原理
蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如-NH+、-COO-、-CONH2、-OH、-SH等，和水有高度亲和性，当蛋白质与水相遇时，蛋白质吸水，在蛋白质颗粒外面形成一层密度较厚的水膜（水化层）。水膜的存在使蛋白质颗粒之间不会碰撞，因此蛋白质在水溶液中比较稳定而不易沉淀，是一种比较稳定的亲水胶体。
蛋白质能形成稳定的亲水胶体的另一原因，是因为在非等电点状态时，在一定pH条件下，蛋白质颗粒上带有同性的电荷，使蛋白颗粒之间相互排斥，不致互相凝集沉淀。
当加入较高浓度的盐时，这些盐类与水有亲和性，与蛋白质争夺水分，破环蛋白质颗粒表面的水化膜，同时，由于这些盐是强电解质，离于浓度相对的比较高，可以大量中和蛋白质颗粒上的电荷，这样使蛋白质成了既不含水膜又不带电荷的不稳定颗粒而容易沉淀。
图1 蛋白质胶体颗粒的沉淀
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