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R&D Systems试剂 Q&A 常见问题解答 (1)

2020.9.15
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

问:R&amD Systems有分装试剂吗?
答:没有分装试剂。R&amD Systems公司不会分装,也没有授权任何公司进行分装。目前市场上所谓的“RD分装试剂”是没有品质保证的3无产品,R&amD Systems公司不承担任何“RD分装试剂”的售后服务。在此,建议广大客户和经销商从R&amD Systems中文网站上公布的正规经销商处订购。

问:R&amD Systems有分装试剂吗?
答:没有分装试剂。R&amD Systems公司不会分装,也没有授权任何公司进行分装。目前市场上所谓的“RD分装试剂”是没有品质保证的3无产品,R&amD Systems公司不承担任何“RD分装试剂”的售后服务。在此,建议广大客户和经销商从R&amD Systems中文网站上公布的正规经销商处订购。


抗体
问:目录中抗体的名称有AB, AF, BAF, MAB之分,它们有何不同?
答:带有AB的抗体是用G蛋白纯化的,带有IgG成分;带有AF的抗体经G蛋白纯化后又经抗原亲和层析纯化。所以,AF抗体为抗原特异性的IgG,而AB抗体含有与目标分析物非特异性的IgG。BAF是生物素化的AF抗体;MAB是单克隆抗体。
问:IgG的分子量是多少?
答:IgG的分子量是150kDa。它由两条50kDa的重链和两条25kDa的轻链组成。
问:某一单克隆抗体所识别的抗原表位是什么?
答:R&amD Systems不做抗原表位的定位。抗体是针对整个免疫原(列在数据表中)的。
问:某一多克隆抗体所识别的抗原表位是什么?
答:多克隆抗体有多个抗原表位识别位点。抗体是针对整个免疫原(列在数据表中)的。
问:什么是Thehalose?它为什么在这个抗体上?
答:Thehalose是一种非还原糖(分子量为342.1), 它在梅拉德式(Maillard)反应中与氨基酸和蛋白都不作用。它存在于许多植物和动物中。有报道称Thehalose是稳定蛋白抗御冰冻的最有效抗冻剂,它使得蛋白抵御水分的能力增加从而使产品在重新溶解时不容易产生沉淀物。
问:采用Trehalose稳定蛋白的原因是什么?
答:Trehalose主要用于在冰冻和脱水过程中保护蛋白。它是非还原糖,在干粉化时呈非结晶状。




细胞凋亡

问:为什么有两套不同的TUNEL试剂盒?
答:因为有两种不同的TUNEL方法可检测细胞凋亡。第一种方法采用TdT酶(末端脱氧核苷酸转移酶)将生物素化的核苷酸加到组织中的DNA片段的3'-羟基端。加入正离子可使这种标记更有效,经生物素化的核苷酸可用streptavidin-HRP共轭物和底物来检测。
第二种方法仍采用TdT酶(末端脱氧核苷酸转移酶)将核苷酸加到样本中的DNA片段的3'-羟基端,但采用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记而非生物素,再用生物素化的抗5-溴脱氧尿苷(BrdU)抗体来检测。采用这种方法的细胞凋亡检测试剂盒包括:TA100 TACS-XL基本原位细胞凋亡试剂盒;TA200 TACS-XL DAB原位细胞凋亡试剂盒;TA300 TACS-XL蓝色标记原位细胞凋亡试剂盒;TA400 TACS-XL补充细胞凋亡试剂盒;
问:Caase活性测试是如何使用的?
答:Caase活性测试为在细胞裂解液中检测蛋白酶活性提供了简捷方便的手段。当对专一Caase的多肽底物被裂解时,释放出的指示分子可用普通读光仪或荧光读板仪来做定量测定。将从细胞凋亡样本得到的信号同未经诱导的对照样本进行比较,可以确定Caase活性增加的倍数,而Caase酶活性是同检测到的信号直接成正比。
问:Caase活性测试是否可用于定量检测?
答:R&amD Systems的Caase活性测定试剂盒可作为半定量测试。检测结果最好用于测量在细胞凋亡细胞中与未经诱导细胞中的Caase活性倍数的增加。实验时,最好采用本底对照(无细胞裂解液或无底物的反应)。如果本底对照也有一定的读数,这一读数应当在记算倍数增加之前从试验数据中差减。
问:Caase活性检测同Caase ELISA试剂盒有何不同?
答:Caase活性检测用于测定不同Caase的蛋白酶的活性,表达为比未诱导样本的倍数增加。Caase ELISA试剂盒用于测定不同Caase在样本中的含量,以pg /mL定量表达。
问:caase X活性测试是对caase X专一的吗?
答:大多数caase会裂解所有的底物,它们根据Michaelis-Menton动力学趋于选择某一底物而非另一底物,但没有任何底物是对某一Caase专一的。比如,Caase 3和Caase 7都可裂解DEVD底物;Caase 9、4、5 都可裂解LEHD。R&amD Systems为每一Caase选择了它所适宜的底物。 如果反应进行的太久,一些Caase会激活另一些Caase。
问:Caase活性检测试剂盒中的细胞裂解液是否同其它试剂盒中的一样?
答:所有的Caase活性检测试剂盒中的细胞裂解液都是一样的。所以,可用它裂解细胞,和用于多种Caase活性的测试。
问:R&amD Systems的Caase抑制剂是否可逆?
答:所有R&amD Systems的Caase抑制剂在N端有苯甲氧碳基(Z-)和FMK功能组,它们可穿孔细胞,是不可逆转的。
问:R&amD Systems是否为Caase活性检测提供阳性对照?
答:R&amD Systems提供多种重组Caase酶,它们是理想的阳性对照。如果试验者自己想建立一阳性对照,有许多可以产生细胞凋亡的阳性对照的方法都已发表。如果将细胞同2 mM星形孢菌素(Stauroorin)温育2小时,可诱导绝大多数细胞类型进入细胞凋亡。R&amD Systems有文献资料列举了对Caase如何产生阳性对照,可向我们的技术服务索取。


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