首先,将0.1cm的电击杯放在冰上进行预冷,冻存的感受态细胞取出冰上溶解。
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然后,用100微升的感受态细胞加入1微升纯化的连接液,或者加入0.5微升未纯化的连接液,小心混匀,在冰上放置二十分钟。
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然后,将混合液加入预冷的电击杯中,注意擦干杯外的水,防止电火花,放入电转化仪的反应槽内,接上电源。
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然后,在3kv、200电阻和25微F的BioRad电转化仪,0.2电转化杯,时间常数在4.5-5ms之间,然后进行点击。
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然后,在听到蜂鸣声后,向电击杯中迅速加入1ml37摄氏度的保温的SOC液体培养基,将混合液洗出,转移到1.5ml的离心管中。
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最后,在37摄氏度220-250r/min复苏培养一小时,使其充分表达抗性,取适量涂平板,将平板倒置在培养箱中,37摄氏度下培养16-24小时。