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外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞
X-galAmpLA培养基水抗生素
培养皿灭菌锅离心管摇床
1. l ml X-gal (20 mg/ml),25 ml Amp(100 mg/ml),250 ml 制备选择性培养基平板:在融化的250 ml LA培养基中250 mI PTG (200mg/ml),混匀后倒入灭菌培养皿中;2. 取出制备好的感受态细胞,放在冰上融化;3. 连接产物,用移液器轻轻吸打均匀,置冰上;每管感受态细胞加入1 μl4. 电转化仪选择1800 V作为输出电压;5. 将要转化的混合物加入预冷的1 mm的电转化杯中,立即按下按纽电击;6. 立即加1 ml SOC培养基到转化杯中重悬细胞;7. 将细胞转入合适的培养管中37 ℃培养1小时;8. 吸取合适体积的菌液涂布已倒好的选择培养基平板;9. 37 ℃培养过夜,观察结果。