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关于单克隆抗体制备脾细胞的选择介绍

2022.10.19
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  1.材料

  (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。

  单克隆抗体制备流程

  单克隆抗体制备流程

  (2)1640培养液(3)2.5%FCS-1640营养液

  2.操作方法

  (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。

  (2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。

  (3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中,冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。

  (4)用镊子轻轻挤压脾,做成脾细胞悬液,用毛细管将悬液移入小试管中。

  (5)直立小试管3min,使大块的结缔组织下沉,把细胞悬液移入离心管中。

  (6)以2.5%FCS—1640充满离心管,并以400g离心7min~10min(与此同时应开始制备骨髓细胞)。

  (7)把沉淀用约10ml的新鲜培养液再悬浮。

  (8)重复⑹、⑺步骤。

  (9)计算细胞,以台盼兰染色用相差显微镜检查,活细胞数应高于80%为合格。

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