1.材料
(1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。
单克隆抗体制备流程
(2)1640培养液(3)2.5%FCS-1640营养液
2.操作方法
(1)拉颈或用CO2处死小白鼠。
(2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。
(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中,冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。
(4)用镊子轻轻挤压脾,做成脾细胞悬液,用毛细管将悬液移入小试管中。
(5)直立小试管3min,使大块的结缔组织下沉,把细胞悬液移入离心管中。
(6)以2.5%FCS—1640充满离心管,并以400g离心7min~10min(与此同时应开始制备骨髓细胞)。
(7)把沉淀用约10ml的新鲜培养液再悬浮。
(8)重复⑹、⑺步骤。
(9)计算细胞,以台盼兰染色用相差显微镜检查,活细胞数应高于80%为合格。