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色谱分析小技巧 | 何为柱效测试三步曲?

沃特世售后服务
2018.7.24

 

柱效,是色谱柱性能的重要指标之一。一根性能良好的色谱柱,往往是做好分离分析的前提。

在新色谱柱开始使用前,测定柱效可以确认该色谱柱是否是合格产品;在实验开始前,测试柱效可以保证实验顺利开展;在实验过程中出现异常时,柱效测试结果将节约问题排查时间。

那么您知道沃特世色谱柱出厂柱效及柱效测试方法如何快速查找吗?柱效测试有哪些关键因素需要特别注意?柱效又该如何计算?今天小编就这三方面为您一一阐述。

柱效及柱效测试方法的查找

带有eCord的色谱柱:可以贴近沃特世UPLC仪器柱温箱右侧(如下图位置),并在控制台 — 色谱柱 — 色谱柱QC界面直接读取COA测试报告;

不带eCord的色谱柱:可在沃特世官网按照如下方式查询。

按照提示输入以上信息后,您将检索到如下两条结果,请选择色谱柱柱效测试报告,这将显示详细的柱效测试方法及结果。

沃特世反相色谱柱出厂检测时通常以二氢苊作为标准品,在乙腈/水体系中测试。根据二氢苊的理论塔板数、拖尾因子等参数判断色谱柱性能。对于新色谱柱,柱效测试结果在出厂COA数值的70%以上,可认为是合格的产品。

除二氢苊外,也可使用其他中性化合物如甲苯、萘等作为色谱柱性能监测的标准品。建议使用流动相配制相应浓度的标准品溶液,避免溶剂效应。

哪些因素会影响柱效测试结果?

1

系统死体积(谱带展宽)

 

从上图可以看到,系统死体积主要包括进样器、色谱柱和检测器。不合适内径及长度的管线将影响系统死体积。鉴于不同仪器系统的死体积不同,不同规格的色谱柱,尤其是UPLC色谱柱,要在与之适配的仪器系统上使用,才能发挥出应有的效果。

2

色谱柱的连接

 

因沃特世主流色谱柱的In-depth长度较其他厂家色谱柱更长一些,在连接色谱柱时管线出来锥箍的长度要大于3.3 mm,才能确保连接时不产生额外的死体积,以免影响柱效测试结果。若色谱柱连接不好,色谱图上通常表现为峰拖尾。

3

采样速率

 

必须确保一个色谱峰上有足够的数据点以便充分地定义峰形,一般需要25-50个数据点,因此UPLC方法中的采样速率建议设置为20 pt/s。

Empower数据处理

1

安装系统适应性插件

 

Empower软件需安装系统适应性插件,才可以直接计算理论塔板数及拖尾因子等。查看方法如下:在配置系统中选中项目后,右键

2

柱效/拖尾因子计算

 

按照如下步骤逐步操作即可。

若显示的结果是指数形式,可按照以下步骤修改:

以上就是今天干货满满的“三步曲”,希望能为您的柱效测试保驾护航,让色谱柱用得更安心、更放心。

如您对于沃特世色谱柱有其他任何问题,欢迎联系沃特世耗材部客户顾问。

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