样品纯化一直是实验室当中不可或缺的重要一环,而且往往会占用大量的时间和精力,近二十年来,随着工业的发展和技术的进步,全自动的Flash纯化系统逐渐成为未来实验室的标配,越来越多的化学家们正享受着Flash带来的便捷和高效,大大降低了纯化操作对时间的严重依赖性。
在常见的合成以及天然产物纯化实验室中,硅胶是使用最普遍的一种正相填料,可当我们遇到一些极性大或者难分离样品时,往往需要求助于反相C18,以减少裸硅胶带来的拖尾或死吸附。
当从硅胶切换到反相C18的时候,就是我们常说的正反相切换的过程,如果您的实验室只有一台Flash纯化系统,您就涉及到如何具体地进行正反相切换。
大部分情况下,化学家们往往会尽量避免在一台仪器上进行较大程度的溶剂更换,一方面是为了避免残留溶剂对下次分离的影响,另一方面是防止新的溶剂的使用对仪器部件的腐蚀或者溶胀等影响。因此很多实验室都会准备两套Flash系统,一套专门用于反相分离,一套专门用于正相分离,避免交叉污染和不必要的麻烦。
但如果您只有一套系统,也不必担心,Biotage全套Flash系统支持正反相各类常用溶剂,您只需进行一些有效冲洗即可,方法如下:
正相(EA/Hexane)切换到反相(methanol or acetonitrile/water)时,不连接色谱柱的情况下,用50-100mL 乙酸乙酯(EA)冲洗管路,然后50-100mL 甲醇/乙腈冲洗管路,最后再用5%甲醇/水溶液或者乙腈水溶液冲洗即可。
反相(methanolor acetonitrile/water)切换到正相(EA/Hexane)时,不连接色谱柱的情况下,用50-100mL 甲醇/乙腈冲洗管路,然后50-100mL 乙酸乙酯(EA)冲洗管路,最后再用正己烷(Hexane)冲洗即可。
对于大部分Flash来说,正相反的切换都是一个手动而略带繁琐的过程,而对于全新一代Selekt纯化系统来说,独家的两通道系统设计,可以保证正反相切换时全自动进行,无需手动干预,节省您的转换时间。
同时,我们进行了实际的样品测试,
在此反应体系当中,我们通过正相点板进行了样品极性的确认,分别使用了20%和30%这两种不同极性的溶剂体系及逆行确认,TLC点板信息如下:
通过这两个点板信息,Selekt系统可直接计算出洗脱梯度方法,通过给出的方法,在通道一中进行样品分离。
样品量:90mg
色谱柱:10 g, 20 µm, Biotage Sfär色谱柱
正相条件下分离谱图,蓝色峰为目标产物
随后在通道二当中,我们直接进行了相同样品的反相分离,
梯度方法: 50%-100% MeOH /H2O(初次尝试)
样品量:90mg
色谱柱:12 g Biotage SNAP Ultra C18色谱柱
注:由于对此样品没有反相C18性质的相关信息,因此该方法仅通过经验而得,也是第一次进行Flash纯化尝试。
当
反相条件下分离谱图,绿色峰为目标产物
可发现,即使是初次尝试(没有进行梯度优化的情况下),分离情况总体上还是令人满意的。
两相之间的切换无缝链接,不需要多余的手动梯度洗脱,另外两个样品之间也没有任何的交叉污染。
以上即我们为您提供的正反相自动或者手动切换的相关信息,可发现全新的Selekt系统,独家配备双通道分离,可以在正反相之间自由切换,一机双用!
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