Oasis PRiME HLB是一种新型反相固相萃取（SPE）吸附剂，能够简化和加快SPE流程，同时相较其他样品制备方法能够获得更洁净的萃取液。使用Oasis PRiME HLB，使用省略了活化和平衡步骤的3步法（上样-清洗-洗脱）SPE 流程，可成功从全血样品中萃取22种合成大麻素及其代谢物。整个化合物组均可获得出色的回收率，并且能够将基质效应（ME）控制在适当范围内。所有化合物获得的结果具有良好的一致性，变化差异较低。此外，Oasis PRiME HLB与蛋白质沉淀（PPT）相比，能够去除全血样品中超过95%的磷脂。
我们使用沃特世Oasis PRiME HLB30 mg萃取板萃取了22种合成大麻素及其代谢物，所有化合物的校准曲线范围为0.2–100 ng/mL。我们利用质控样品在整个校准浓度范围内获得了准确精密的定量结果。对于这些不同类别的药物及其代谢物的分析（包括中性分子、酸和碱）证明了该方法能够应用于不同化学性质，并可用于新化合物的方法开发，必要时也可对该方法作出适当的调整。
本文中所分析的22种化合物列于图1中，构成了一组包含各类法医毒理学相关合成大麻素的化合物。其中包括金刚烷甲酰吲哚类（AM 1248和AKB48）、萘甲酰吲哚类（JWH 022）、苯乙酰吲哚类（RCS-4和RCS-8）和四甲基环丙基吲哚类（UR-144和XLR11）。还包括JWH-073和JWH-018的主要代谢物，由于其中一些化合物为质谱碎片相同的结构异构体，因此对其准确定量需要达到足够的色谱分离度。
样品制备
结果与讨论
色谱
CORTECS实心核颗粒设计结合了最佳的色谱柱填装技术，可获得出色的色谱性能。使用20 ng/mL校准标准品获得的所有化合物代表性色谱图如图1所示。使用CORTECS UPLC C18色谱柱（90 Å, 1.6 m, 2.1 x 100 mm），在7.5 min内完成所有分析物的分析，总循环时间为8.5 min。所有化合物的峰形良好，无明显的拖尾或不对称，且在5%基线处的所有峰宽小于3 s。
图1. 22种合成大麻素及其代谢物的UPLC-MS/MS色谱图。
回收率和基质效应
本应用纪要中的合成大麻素及其代谢物包含中性、酸性和碱性化合物。使用Oasis PRiME HLB吸附剂能够同时萃取所有待测化合物及其代谢物，无论它们具有何种官能团。根据实验部分所述的公式计算回收率和基质效应（ME），结果如图2所示。采用本文的萃取方案，所有化合物能够实现几乎完全回收，并且大多数分析物的基质效应极小。除一种化合物外，其他所有化合物的回收率均大于或等于80%，所有化合物的平均回收率为91%。所有化合物的回收率一致性好，平均%RSD为5% 。整个化合物组的基质效应非常低。仅两种化合物的基质效应略微超过40%，其余化合物基质效应均低于25%。平均基质效应程度仅为17%。该组合成大麻素的高回收率和极低的基质效应表明：使用Oasis PRiME HLB通过简单的上样-清洗-洗脱流程应用于其他相关化合物时 能够获得类似的结果。
图2. Oasis PRiME HLB μElution板从全血中萃取的合成大麻素的回收率和基质效应。图中的条柱和误差条柱分别表示平均值和标准偏差(N=6)。
磷脂去除
Oasis PRiME HLB的重要特征之一是能够获得较其他样品制备方法更洁净的萃取液。达到这个效果的途径之一是去除内源性磷脂。图3显示了相同样品分别通过Oasis PRiME HLB萃取和蛋白质沉淀处理后所得磷脂分析对比色谱图。与蛋白质沉淀（PPT）相比，Oasis PRiME HLB去除了超过95%的磷脂（图3），获得了更洁净的萃取液。这意味着基质效应将得到有效的降低、色谱柱的寿命会更长，并且质谱离子源的维护频率也会相应降低。
图3. Oasis PRiME HLB萃取与蛋白质沉淀的磷脂残留色谱对比。比例一致。
标准曲线性能、准确度、精密度和灵敏度
为了评估分析方法的线性和分析灵敏度，我们为所有组分建立了浓度范围为0.2-100.0 ng/mL的校准曲线。此外，还对浓度为2.5、7.5和75 ng/mL的质量控制样品（N=4）进行了萃取和分析。所有化合物的校准曲线R2值和QC总结数据汇总于表1中。实验在低、中和高浓度范围内均获得了准确的质量控制（QC）结果。低浓度QC样品（2.5 ng/mL）的准确度范围为95-110%（化合物AM2233除外），平均值为102%。所有分析物（一个例外）的中、高浓度QC样品所得结果非常出色，准确度在期望值的15%范围之内。并且，大多数分析物的RSD%低于10%，最大不超过15%，表明分析精度非常好。各浓度水平（低、中和高）下的准确度评估结果显示，平均回收率介于93%-104%之间。大多分析物的定量限能达到0.1 ng/mL且不大于1 ng/mL。这些结果未使用氘代内标，再次证明了使用Oasis PRiME HLB的一致性。
表1. 所有化合物的R2值和质量控制结果。下方的平均值表示所有化合物在特定浓度下的平均值。右侧的值表示各个化合物在整个QC浓度范围内的平均值。
结论
本应用纪要重点介绍了Oasis PRiME HLB的使用，这是一种新型反相SPE吸附剂，它能够在去除几乎所有内源性磷脂的同时简化和加快SPE流程。使用简单的上样-清洗-洗脱策略，无需任何吸附剂活化或平衡步骤，即可从全血样品中萃取一组22种合成大麻素。
整个化合物组的平均萃取回收率为91%，平均基质效应程度仅为17%。所有化合物获得的结果具有良好的一致性，%RSD均值为5%。此外，相比蛋白质沉淀法，本文的方法能够去除超过95%的磷脂。定量结果同样出色。即使不使用氘代内标，校准曲线仍具有良好线性，其中21种化合物（共22种）的R2值为0.99。97%的QC结果处于目标值的15%范围内，并且所有%RSD均小于15%。
总之，Oasis PRiME能够实现良好的一致性、高回收率和低基质效应，并能基本去除全血样品中的内源性磷脂。即使不使用氘代内标，也能获得出色的定量结果。
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