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蛋白质的N端测序介绍及样品要求

毅新质谱
2018.9.18

检测仪器

岛津 PPSQ-33A 蛋白多肽自动测序仪

主要应用:

1. 样品:蛋白质,多肽样品的氨基酸序列测定

2. 优势:能连续测定 60 个以上的氨基酸序列

3. 来源: 天然提取(动物/植物/微生物);合成多肽;重组蛋白等

样品要求:

1. 纯度: >95(基于摩尔数)

2. 含量: 50-100 Pmol (液体体积控制在 20ul)

3. 修饰封闭: N 端未被封闭

4. 样品形式: 液体;干粉;PVDF 膜

5. 无干扰物: 蛋白酶;氨基酸;胺;盐分;乙醛;去污剂 等

客户提供信息: :

1. 纯度:纯度检测结果及图谱信息

2. 修饰:样品可能修饰情况

3. 制备方法:如 SDS,HPLC 及其它方式

4. 验证目的:提供理论序列

5. 表观分子量

其它注意事项

1. 邮寄要求:使用干冰冷冻保护

2. 液体样品:

可用溶剂:蒸馏水、TFA 水溶液、醋酸水溶液、乙氰水溶液以

及三甲基胺水溶液。

不可用的溶剂:氨盐、Tris 等,含有 1 级、2 级胺的盐溶液,

含有 SDS 的溶液

3. 固体样品:

干燥处理的样品,请先确认干燥处理前的溶剂中不含有上述不

兼容的溶剂。如果含有不兼容的溶剂时,请告知我方检测人员。

4. PVDF 膜:注意以下方面

1) 样品量:5-8 条泳道,每条泳道的样品尽量用最高浓度样品,

上最大体积(尽量使条带长胖为正常的 2-3 倍宽度)

2) 硝酸纤维素膜:具有耐药性,不能使用。

3) 在电转印中使用的缓冲液尽可能不含甘氨酸。在使用了含甘氨

酸的缓冲液时,请告知我方检测人员。

4) 染色剂推荐使用考马斯亮蓝(CBB-R250)

5) 推荐使用下列的 PVDF 膜

转膜效果实例参考:(此浓度下,可测定 20 个氨基酸长度)

附录:

案例一

案例二

毅新质谱期待与您的合作!

联系人:张女士

电话:1368317255 

微信:1660531731

邮箱:zhangxf@clintof.com

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