葫芦巴碱（trigonelline），是从豆科植物葫芦巴中分离提取的一种生物碱。在中医药典中，葫芦巴碱具有温肾、去寒、止痛之功效，是治疗肾脏冷虚、小腹冷痛、寒湿脚气的主要药物。葫芦巴碱也可从咖啡豆中提取。
目前测定咖啡中葫芦巴碱的方法较多。本文参照行业标准NYT 3012-216，采用高效液相色谱法并选用氨基柱TSKgel Amide-80 HR 来检测咖啡提取液中的葫芦巴碱含量。
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溶液的配制
称取试样0.5g（其中生咖啡0.2g，精确到0.01g）于100mL烧杯中，加入80mL沸水。盖表面皿，置于电热板上煮沸提取30min，冷却至室温，转移到100mL容量瓶中，加入1mL磺基水杨酸溶液，摇匀，水定容至刻度。上清液用水相0.45μm滤膜过滤，收集滤液上机测定。
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分析条件
色谱柱：TSKgel Amide-80 HR（5μm, 4.6mmI.D.×25cm）
流动相：甲醇+水（88+12）
流 速：0.8mL/min
柱 温：25℃
检测器：UV@260 nm
进样体积：10μL
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分析结果
图1. 葫芦巴碱对照品色谱图
图2. 咖啡提取液色谱图
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实验结论
色谱图中，咖啡提取液中葫芦巴在色谱柱上有较强的保留并与其他提取成分色谱峰有很好的分离，经计算得该咖啡样品中葫芦巴碱含量为0.58g/100g。
采用上述方法，使用TSKgel Amide-80 HR (5μm，4.6mmI.D.×25cm) 色谱柱，可以满足NYT 3012-2016中对咖啡及制品中葫芦巴碱分析测定要求。
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