摘要
本实验参考GB 29694-2013方法建立了猪肉和鸡肉中甲氧苄啶的前处理方法,采用固相萃取(SPE)结合高效液相色谱(HPLC)对猪肉和鸡肉中的甲氧苄啶进行了测定。样品经乙酸乙酯提取后,用0.1 mol/L的盐酸溶液转换溶剂,正己烷除脂,再用PCX小柱(60 mg/3mL)进行净化,Gemini NX-C18 (5 µm,4.6 × 250 mm) 色谱柱进行检测,外标法定量。结果表明,当加标量为10 µg/kg时,回收率在90% ~ 105%之间,能够满足检测要求。
样品信息
表1.样品信息
样品名称
结构式
分子量
CAS编号
甲氧苄啶
290.3
738-70-5
实验步骤
前处理方法
样品提取
称取5 g样品置于50 mL离心管中,加入20 mL乙酸乙酯,涡旋2 min,4000 r/min离心5 min,转移上清液至100 mL鸡心瓶中。残渣中再加入20 mL乙酸乙酯,重复提取一次,合并两次上清液于同一100 mL鸡心瓶中,向鸡心瓶中加入0.1 mol/L盐酸溶液4 mL,于40℃旋蒸至3 mL左右,转移至30 mL分液漏斗中,鸡心瓶用2 mL 0.1mol/L盐酸溶液清洗,将清洗液也转移至同一分液漏斗中,再用3 mL正己烷清洗鸡心瓶,也转移至同一分液漏斗中,振摇1 min,静置分层,将下层清液收集于10 mL离心管中,上层清液弃去,再将收集的下层清液倒回分液漏斗中。再用3 mL正己烷清洗鸡心瓶,转移至同一分液漏斗中,振摇1 min,静置分层,转移下层清液至10 mL离心管中,待净化。
样品净化
将PCX小柱依次用3 mL甲醇和3 mL 0.1 mol/L盐酸溶液活化平衡,将待净化液转移小柱上,控制流速1 mL/min左右,弃去流出液,用1 mL 0.1 mol/L盐酸溶液和2 mL 50%甲醇乙腈溶液淋洗小柱,弃去流出液,抽干小柱,最后用4 mL 5%氨化甲醇洗脱,收集流出液于40℃氮吹至近干,用0.1%高氯酸溶液︰甲醇=90︰10(V/V)定容至1 mL,用0.22 µm尼龙针式过滤器过滤,待检测。
色谱条件
色谱柱:Gemini NX-C18,5 µm,110 Å,4.6 × 250 mm;
流动相A:0.1%高氯酸溶液;
流动相B:甲醇;
流速:1 mL/min;
柱温:35℃;
进样量:20 µL;
检测波长:230 nm;
梯度条件:见表2。
表2. 梯度条件
时间/min
A%B%0901059010154060204060
20.1
9010309010
实验结果与讨论
由表3可知,采用PCX小柱净化鸡肉和猪肉样品,回收率均在90% ~ 105%,能够满足检测要求, RSD小于15%,重复性良好。由图1 ~ 图5可知,该方法的净化效果良好,并且,使用Gemini NX-C18色谱柱检测甲氧苄啶,峰型良好良好,保留时间稳定。
表3. 鸡肉、猪肉基质加标回收实验结果
(添加水平10 µg/kg)
物质名称
保留时间/min
平均回收率/%
变异系数/%
鸡肉猪肉鸡肉猪肉甲氧苄啶
14.274
92.3
103.8
10.9
3.9
实验谱图
图1. 0.05 µg/mL甲氧苄啶标准溶液色谱图
图2. 鸡肉基质空白色谱图
图3. 10 µg/kg鸡肉基质加标色谱图
图4. 猪肉基质空白色谱图
图5. 10 µg/kg猪肉基质加标色谱图
结论
本实验建立了鸡肉和猪肉中甲氧苄啶的前处理方法,用固相萃取结合高效液相色谱对加标量为10 µg/kg的样品进行了检测。实验结果表明,对于加标量为10 µg/kg的样品,甲氧苄啶的回收率均在90% ~ 105%之间,且变异系数小于15%,能够满足检测要求,说明该方法可以用于鸡肉和猪肉中甲氧苄啶的检测,且稳定性良好。
产品附录
产品名称
规格描述
包装数量
订货号
Cleanert PCX
60 mg/3 mL
50支/pk
CX0603
Gemini NX-C18
5 µm,
4.6 × 250 mm
1支
00G-4454-E0
1.5 mL样品瓶
短螺纹棕色带书写处
32 × 11.6 mm
100/pk
AV1111-0
1.5 mL样品瓶盖
9 mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫
45°Shore A; 1.0 mm
100/pk
AV2100-A
Nylon针式过滤器
单膜,13 mm,0.22 µm
200个/包
AS021320-19
一次性注射器
2 mL无针头
100支/包
LZSQ-2ML
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