尿激酶是从新鲜人尿中提取的，或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋白，是临床上一种常用的溶解血栓的药物。它由高分子量尿激酶 (Mw=54000) 和低分子量尿激酶 (Mw=33000) 组成的混合物。
为使尿激酶达到最佳分离效果，本应用使用粒径2 µm的TSKgel UP-SW2000超高效液相尺寸排阻色谱柱与G2000SWXL色谱柱，对尿激酶进行了对比分析。
溶液的配制
色谱流动相配制：0.2 mol/L磷酸二氢钠水溶液，用磷酸调pH至3.0 。
样品：尿激酶测试方法优化溶液浓度：2.5 mg/mL
分析条件
仪器：Thermo Ultimate3000
色谱柱1：TSKgel UP-SW2000 (2µm, 4.6 mmI.D.×30cm)
色谱柱2：TSKgel G2000SWXL (5µm, 7.8 mmI.D.×30cm)
流速：0.18 mL/min for UP-SW2000、0.5 mL/min for G2000SWXL
柱温：25℃
样品盘温度：10℃
进样量：10 µL
检测器：紫外检测器@280nm
分析结果
图1. UP-SW2000色谱柱分离谱图
图2. G2000SWXL色谱柱分离谱图
结果与讨论：
相较于G2000SWXL色谱柱，TSKgel UP-SW2000对多聚体、高分子量尿激酶、低分子量尿激酶的分离度均有所提高。
同时对比了等量溶质不同进样体积，高浓度样品小进样量，分离度较好一些。UP-SW2000色谱柱可满足药典要求：高分子量尿激酶峰面积占90%以上，且与低分子量尿激酶分离度大于1.0。
凝胶色谱法测定β-内酰胺类抗生素高分子聚合物东曹色谱产品在病毒载体分析与分离纯化中的应用两步层析法平台，降低单克隆抗体下游纯化工艺成本药典应用︱参照2020版《中国药典》分析氨甲环酸HILIC色谱柱TSKgel Amide-80测定甜菜碱的含量
首页
