1.色谱检测参数
液相色谱仪：移去色谱柱（包括保护柱，鬼峰补集柱等），用内径为0.005英寸（≈0.13mm）的约1m的管线连接进样器和检测器。检测器：UV流动相A：纯化水流动相B：0.1%的丙酮水溶液，即1ml丙酮加入1000ml纯化水中混匀即得。样品溶液：0.1%的丙酮水溶液。流速：1.0ml/mL波长：265nm柱温：25℃进样体积：10μL
流动相洗脱梯度如下：
时间（min）
流动相A（%）
流动相B（%）
0
100
0200
100
250
100
25.1
100
030
100
0
2.运行的色谱图（梯度曲线）如下：
tD=t1/2-0.5tG
（色谱图来自Thermo U3000)
3.滞留体积计算公式如下：
VD=tD*F0=（t1/2-0.5tG）*F0
式中：VD：滞留体积，mL；
tD：滞留时间，min；
F0：流速，1.0mL/min；
t1/2：检测器响应达到50%B时的时间，min；
tG：0%B-100%B梯度总时间，20min；
计算举例如下：
梯度基线起始0%B时检测器响应值为0mAU，梯度基线结束100%B时检测器响应值为200mAU，则梯度基线中间50%B时检测器响应值为100mAU，此时从梯度曲线上找到检测器响应值为100mAU时的时间即为t1/2（比如：10.851），然后带入滞留体积计算公式计算（VD）即可。
VD=tD*F0=（t1/2-0.5tG）*F0
=（10.851min-0.5*20min）*1.0mL/min =0.851mL
建议至少平行测试3针，计算VD的平均值和RSD%。
4.参考依据
现代液相色谱技术导论第3版第三章3.10小节。
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