探索病人自身的免疫系统在对抗肿瘤中的作用至关重要。抗癌反应的一个关键组成部分是免疫细胞，如细胞毒性T细胞和自然杀伤细胞，通过免疫细胞杀伤（ICK）过程诱导恶性细胞死亡的能力。
图1 各种免疫细胞或免疫组分在肿瘤免疫应答中的作用机制
因此，在体外建立ICK模型至关重要。目前有多种传统技术可用于评估ICK，如流式细胞仪和各种生化读数等，然而，这些工具对洞察细胞间的动态相互作用仍然有限：
采用耗时的“终点式”检测，每次检测只能获取一个时间点的结果；
需要多次清洗，需要利用辐射性物质（如51Cr释放实验）或抗体标记（如流式细胞分析）进行定量分析；
需要将多个时间点的不同样本（孔）数据关联在一起，以生成时程曲线，从而可能导致人为因素误差；
检测时缺少环境控制而导致细胞变化，从而可能出现不需要或误导性的实验结果。
Incucyte®
提供全套免疫细胞杀伤方案，可实时查看和自动分析免疫细胞介导的肿瘤细胞杀伤作用，通过这种非侵入性、无干扰性的细胞分析平台对免疫细胞、抗体功能&杀伤能力获取新的见解。Incucyte®免疫细胞杀伤方案适用于研究：
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细胞毒性T细胞杀伤
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抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）
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在肿瘤球模型中的免疫细胞杀伤
图2 采用Incucyte®活细胞分析系统分别检测免疫细胞对贴壁肿瘤细胞（SKOV-3，左图）、悬浮肿瘤细胞（WIL-NS，中图）和A549肿瘤球的杀伤作用（右图）。
Incucyte®免疫细胞杀伤试验的主要优势
01
实时查看免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用及杀伤过程，并进行全自动化的分析。
观察并量化免疫细胞与肿瘤细胞之间的动态相互作用
揭示细胞之间的相互作用，从而深入了解细胞亚群之间的免疫突触
使用非干扰试剂测量肿瘤细胞的死亡和对肿瘤细胞增殖的抑制作用
图3 利用Incucyte®免疫细胞杀伤试验查看免疫细胞/肿瘤细胞相互作用。(1)细胞毒性T细胞和红色荧光标记的肿瘤细胞之间的相互接触。T细胞分裂。(2)肿瘤细胞受到细胞毒性T细胞的攻击：“死亡之吻”。(3) 追踪肿瘤细胞凋亡（caspase 3/7绿色荧光标记）、核固缩和细胞死亡。(4)肿瘤细胞分裂。
图4 使用Incucyte® FabFluor-488试剂，在共培养体系中查看和量化免疫细胞与肿瘤细胞之间的作用。A549肿瘤细胞（CytoLight Red荧光试剂标记）与预激活或未激活的PBMC共培养，加入Incucyte® FabFluor-488-α-CD45和Incucyte® Opti-Green试剂来标记淋巴细胞。加入PBMC 2小时后拍照显示CD45+细胞（绿色）和A549细胞（红色）之间的作用。相互作用（overlay，图示黄色mask）定量分析显示活化效应细胞与靶细胞的相互作用显著增加（结果见柱状图）。这一分析采用Incucyte® Cell-By-Cell 软件完成。
02
直接测量肿瘤细胞死亡和活性
使用直观的Incucyte®图像分析工具有选择地量化肿瘤细胞增殖和凋亡。
使用Incucyte® Caspase 3/7凋亡试剂检测肿瘤细胞凋亡，使用Incucyte® NucLight慢病毒试剂检测肿瘤细胞增殖。
在细胞培养箱中全程监控肿瘤细胞的杀伤过程。可用于长期研究(>5天)。
NucLight Red标记的SK-OV-3细胞与人PBMC共培养，并加入不同浓度的曲妥珠单抗（赫赛汀），用Incucyte® Caspase-3/7 Green试剂标记细胞凋亡。结果显示随着曲妥珠单抗浓度变化，SK-OV-3细胞增殖呈浓度依赖性降低，细胞凋亡呈浓度依赖性增加。
SK-OV-3细胞+未激活人PBMC
SK-OV-3细胞+预先激活的人PBMC
图5 用Incucyte®活细胞分析系统查看并量化ADCC效应。
03
有多种灵活的共培养体系和方案供选择
针对PBMC、细胞毒性T细胞(CD8+)和NK细胞与贴壁或悬浮肿瘤细胞共同培养的细胞免疫细胞杀伤方案
在T细胞介导的细胞毒性和抗体依赖的细胞介导的细胞毒性（ADCC）试验中灵活选择效应细胞和靶细胞
可采用3D肿瘤球模型，对免疫细胞杀伤进行实时查看和量化
图6 将PBMC与SKOV-3（HER2阳性）或A549（HER2阴性）肿瘤细胞共培养，其中肿瘤细胞预先用NucLight Red荧光试剂标记。(A) 曲妥珠单抗诱导SKOV3肿瘤细胞增殖呈浓度依赖性抑制效应，(B) A549细胞未观察到抑制作用。(C) 曲妥珠单抗抑制SKOV-3细胞增殖的浓度反应曲线。(D) 对照组和曲妥昔单抗组在72小时的代表性图像。上一排是原始图像，下一排是mask图。
04
即混即读的96/384孔板方案，可用于高通量筛选
无需清洗，无需取出细胞，无放射性，无需抗体标记
设置完实验即可走开，完全自动化的图像捕获和定量分析
兼容流式细胞术和终点式生化测量——当检测完成时，采集细胞/上清液可用于下游试验
免疫细胞杀伤应用指南
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