上期小编给大家介绍了沃特世在中药配方颗粒中比较有优势的几款色谱柱，但具体到色谱条件该怎么建、什么时候需要进行色谱柱筛选，有些小伙伴还是存在不少疑问。
今天，小编就结合实际案例跟大家分享如何快速新建指纹谱图液相分析方法。
图1. 中药配方颗粒推荐色谱柱
指纹/特征图谱粗筛色谱条件
(UPLC方法)
仪器：ACQUITY UPLC H-Class
色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3，1.8 μm，2.1×100 mm（PN:186003539）
流动相A：0.1%磷酸
流动相B：乙腈
流速：0.4 mL/min
波长：205 nm+全波长
柱温：30度
进样量：1 μL
图2. 梯度表
按照如上色谱条件，将提取的配方颗粒样品集中进样，结果如下：
图3. 在ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱上进行样品粗筛
从谱图可见：S1、S2、S3、S5、S6中组分少，峰形对称，可在此基础上优化梯度；
S4、S7、S8组分复杂，先调整梯度，使峰均匀分布后，再考察色谱柱、柱温、流速等对分离效果的影响。
优化案例
优化案例一：升麻
调整洗脱梯度，使峰分布更均匀。
图4. 升麻优化结果
优化案例二：旋覆花
Step1：优化梯度，使峰均匀分布
图5. 旋覆花-梯度优化
Step2：考察添加剂浓度
图6. 旋覆花-添加剂浓度对分离的影响
Step3：筛选色谱柱
图7. 旋覆花-色谱柱对分离的影响
Step4：确定色谱条件，如有必要可继续优化。
图8. 旋覆花在BEH Shield RP18色谱柱上的分析结果
指纹/特征图谱粗筛色谱条件
(HPLC方法)
仪器：ACQUITY Arc
色谱柱：CORTECS T3，2.7μm，4.6×150 mm（PN:186008495）
流动相A：0.1%磷酸
流动相B：乙腈
流速：1.0 mL/min
波长：205 nm+全波长
柱温：30度
进样量：5 μL
图9. 梯度表
按照上述条件粗筛样品，再按照上文中的方式优化条件即可。
图10. 在CORTECS T3色谱柱上进行样品粗筛
总结
综上，在ACQUITY UPLC HSS T3/CORTECS T3色谱柱上，使用大梯度粗筛，可以快速判断样品的整体峰分布。对简单样品通过梯度优化即可得到满意谱图，但对复杂样品，除梯度优化，还需要考察色谱柱不同键合相及规格、添加剂浓度及种类、柱温、流速等条件对分离结果的影响，才可以获得一个满意的结果。
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