浸出物存在于最终原料药和药品中,通常包含在可提取物内,但由于浸出物的量极小以及分离和检测方法的限制,很难被定量或定性。应先获得最差条件下的可提取物数据,将其用于药品的安全性评估。可提取物反映了浸出物的最大可能,无论是否要做浸出物试验,可提取物的测试和评估都非常重要。
根据 BPOG(BioPhorum Operations Group)指南和 USP<665>生产用塑料组件系统指南(草案版),应使用各种溶剂和提取时间进行可提取物的考察,并使用合适的分析方法进行分析。如果用于制造一次性系统的聚合物材料的确切成分未知,未知物鉴定至关重要。
为了加快鉴定速度,我们推出了E&L筛查用标准物质,其中包含分别适用于LC和GC检测的常见组分。使用这些标准物质,不仅可以对未知物进行鉴定,而且定量结果可以追溯至NIST标准参考物质。
以下应用是关于GC/MS测定可提取物,目的是鉴定和定量过滤器研究中存在的主要可提取物。
根据BPOG协议,使用Supelco® SLB®-5ms 气相毛细管柱进行实验。在40℃下用注射用水在轨道旋转提取7天后采集代表性样品,并使用二氯甲烷作为萃取溶剂通过液-液提取 (LLE) 进一步处理,并使用三联苯-d14作为液液提取内标。分析前加入菲-d10作为样品内标强化样品,样品和标准品在一个序列中运行。
表1. 实验条件
仪器
Agilent® HP7890, QTOF 7200
色谱柱
SLB®-5ms, 30m x 0.25mm, df=0.25 µm (28471-U)
柱升温程序
50℃保持3min, 10℃/min 升温至320℃,保持15min
进样口温度
280℃
载气
氦气, 1.2mL/min
检测器
MSD, full scan, m/z 25-800, 传输线温度250℃, EI源
离子源温度230℃, 电子能量:70eV
进样
1µL, 脉冲不分流:350kPa, 0.5min, 1:25
衬管
4mm内径进样口衬管, 分流, 锥形, 带玻璃棉, 去活
样品
1. 用于GC分析的14种E&L筛查混标, 50 mg/L溶于叔丁基甲基醚
2. 注射用水过滤提取一天
图1 14种GC可提取物和浸出物筛查混标色谱图,
50mg/L溶于叔丁基甲基醚
(出峰顺序及化合物名称见表2)
表2. 峰表
Peak
Name
CAS
货号1
1,3-二叔丁基苯(DBB)
1014-60-4
96659
2
ε-己内酰胺(CAP)
105-60-2
01483
3
2,6-二叔丁基苯酚
128-39-2
96852
4
2,4-二叔丁基苯酚
96-76-4
00437
5
二丁基羟基甲苯(BHT)
128-37-0
47168
6
棕榈酸
57-10-3
76119
7
2-巯基苯并噻唑(2-MBT)
149-30-4
96051
8
硬脂酸(SA)
57-11-4
85679
9
双酚A(BPA)
80-05-7
42088
10
油酸酰胺(Ole)
301-02-0
08393
11
邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)
117-81-7
67261
12
芥酸酰胺(Eruca)
112-84-5
01374
13
抗氧剂168 氧化物(Irgafos168-oxide)
95906-11-9
96839
14
抗氧剂1076(Irganox1076)
2082-79-3
00318
图2 一次性设备提取物样品
GC可提取物和浸出物筛查混标的色谱图如图1所示,14种可提取物标准物质都被检测到并且几乎完全分离。质谱检测的共流出组分可以通过提取离子流色谱图来识别。通过匹配保留时间和m/z比,ε-己内酰胺被确定为一次性过滤器提取过程中的主要可提取物(图2)。可以基于筛查混标的提取离子流色谱图对己内酰胺峰进行定量分析。
本实验使用相关产品
描述货号
GC可提取物和浸出物筛查混标
01829
GC色谱柱 SLB®-5ms, 30 m x 0.25 mm, df = 0.25 µm
28471-U
SupraSolv®二氯甲烷,用于GC ECD/FID
1.06054
除上述实验中提到的14种GC可提取物和浸出物筛查混标外,我们还可以提供LC筛查混标和其他E&L单标,具体见表3。
表3. LC筛查混标及其他E&L单标
_名称
CAS
货号混标
LC的可萃取物和可浸出物筛查混标
50 μg/mL
溶于乙腈
95636
混标包含的各单标组分
抗氧剂1010 (Irganox1010)
6683-19-8
96656
抗氧剂1076 (Irganox1076)
2082-79-3
00318
紫外线吸收剂 UV-P (Dometrizol (Dome)
2440-22-4
96697
ε-己内酰胺(CAP)
105-60-2
01483
二苄胺(DBA)
103-49-1
95728
苯甲酸(BA)
65-85-0
12353
2-巯基苯并噻唑(2-MBT)
149-30-4
96051
双酚A(BPA)
80-05-7
42088
2-乙基己酸(EHA)
149-57-5
02529
双(4-氯苯基)砜(CPS)
80-07-9
96153
3,5-二叔丁基-4-羟基苄醇(DBOHP)
88-26-6
96857
二丁基羟基甲苯(BHT)
128-37-0
47168
1,3-二叔丁基苯(DBB)
1014-60-4
96659
油酸酰胺(Ole)
301-02-0
96709
硬脂酸(SA)
57-11-4
85679
双(2-乙基己基)邻苯二甲酸酯(DEHP)
117-81-7
67261
芥酸酰胺(Eruca)
112-84-5
01374
抗氧剂3114(Irganox3114)
27676-62-6
96737
抗氧剂168 氧化物(Irgafos168-oxide)
95906-11-9
96839
2,4-二叔丁基苯酚
96-76-4
00437
棕榈酸
57-10-3
76119
其他单标
二苯甲酮
119-61-9
PHR1204
双(2,4-二叔丁基苯基)磷酸酯
69284-93-1
90048
1-癸烯
872-05-9
78270
3,3''-硫代二丙酸双十二烷酯
123-28-4
78132
抗氧剂(Irganox 1098)杂质
82304-66-3
78478
正二十二烷
629-97-0
78290
正二十烷
112-95-8
78292
4-乙氧基苯甲酸乙酯
23676-09-7
78699
乙二醇单丁基醚
111-76-2
78263
十六烷
544-76-3
78293
异佛尔酮
78-59-1
78345
异戊酸
503-74-2
78266
十八烷
593-45-3
78294
1-十八烯
112-88-9
78295
1-辛烯
111-66-0
78340
双酚F二缩水甘油醚(BPFE)
2095-03-6
96142