摘要
醋酸阿比特龙和恩杂鲁胺是治疗转移性去势抵抗性前列腺癌的两种新药。这些药物的代谢很广泛。主要代谢物是 N-去甲基恩杂鲁胺、恩杂鲁胺羧酸、阿比特龙 N-氧化物硫酸盐和阿比特龙硫酸盐；其中 N-去甲基恩杂鲁胺据报道具有抗雄激素能力。一种用于同时定量阿比特龙、恩杂鲁胺和主要代谢物的液相色谱-串联质谱方法已被开发和验证，以支持治疗药物监测。
关键词：阿比特龙，恩杂鲁胺，代谢物，N-去甲基恩杂鲁胺，LC-MS/MS，治疗药物监测；
＋
样品信息
阿比特龙，恩杂鲁胺，N-去甲基恩杂鲁胺；
＋
实验部分（仪器、试剂与材料）
1
主要仪器设备
三重四极杆质谱仪 6500 (Sciex, Framingham, MA)
2
试剂材料
乙腈、甲醇（均为超梯度级）、水和甲酸（均为 LC-MS 级）。
二甲基亚砜 (DMSO)，K2EDTA 血浆。
3
样品制备
从接受治疗的患者获得全静脉血并在4℃以1800g离心5分钟。分离上清液（血浆部分）并在-20℃储存直至分析。样品在处理前解冻，将 50 μL 等分试样转移到琥珀色的 1.5 mL 容器中。向每个样品中加入体积为 15 μL 的 IS 工作溶液。用 150 μL乙腈沉淀蛋白质，然后将样品涡旋、摇动（在 11,300g 下 10 分钟）和离心（在 23,100g 下在 208C 下 10 分钟）。将 100 μL的上清液转移到 1.5-mL 管中，并用 100-μL 水（LC-MS 级）稀释。将最终提取物转移到琥珀色玻璃自动进样器瓶中。
4
LC-MS/MS色谱条件
色谱柱： Kinetex C18 column (150 *2.1 mm, particle size 2.6 μm, Phenomenex)
流动相A：0.1%甲酸水溶液；
流动相B：0.1%甲酸甲醇溶液；
流速：300 μL/min；
柱温：40 ℃；
进样量：20 µL；
流动相梯度：见表1
表1 流动相梯度表
时间 (min)
A%B%0703027030
2.01
307073070
7.01
05100
100
＋
实验结果
图1 恩杂鲁胺 (1A)、N-去甲基恩杂鲁胺 (1B)、恩杂鲁胺羧酸 (1C)、阿比特龙 (2A)、阿比特龙 N-氧化物硫酸盐 (2B) 和阿比特龙硫酸盐 (2C) 的分子结构和可能片段化。母离子 m/z (+H) 分别为 465.0、451.1、452.1、350.1、446.0 和 430.0。
图2 恩杂鲁胺（1A）、N-去甲基恩杂鲁胺（1B）、恩杂鲁胺羧酸（附加峰属于恩杂鲁胺羧酸，第一个峰对应于N-去甲基恩杂鲁胺）（1C）、阿比特龙（ 2A)、阿比特龙 N-氧化物硫酸盐 (2B)、阿比特龙硫酸盐 (2C) 和 ISs 2H6-恩杂鲁胺 (3A)、2H6-N-去甲基恩杂鲁胺 (3B) 和 2H4-阿比特龙 (3C)
表2 在 LLOQ、中浓度和高浓度下测试的阿比特龙、恩杂鲁胺和两种主要代谢物在人血浆中的检测性能数据
表3 10 名接受阿比特龙 (1000 mg/d) 或恩杂鲁胺 (160 mg/d) 的患者的平均稳态血浆浓度和范围
结论：
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开发并验证了一种 LC-MS/MS 方法，用于同时分析阿比特龙、恩杂鲁胺、N-去甲基恩杂鲁胺、恩杂鲁胺羧酸、阿比特龙 N-氧化物硫酸盐和阿比特龙硫酸盐。由于阿比特龙 N-氧化物硫酸盐和恩杂鲁胺羧酸在 DMSO 中的稳定性低，工作溶液在血浆中用新制备的储备溶液制备。阿比特龙的浓度范围为 1–100 ng/mL，恩杂鲁胺和恩杂鲁胺羧酸的浓度范围为 5–500 ng/mL，N-去甲基恩杂鲁胺的浓度范围为 10–1000 ng/mL，阿比特龙 N-氧化物硫酸盐的浓度范围为 30–3000 ng/mL， 选择 100–10,000 ng/mL 的硫酸阿比特龙来测量患者稳态血浆中的化合物浓度。这些分析物的联合测定提供了一种测量血浆浓度的有效方法。该测定现已成功实施，以促进对阿比特龙、恩杂鲁胺和两种主要代谢物的治疗药物监测。
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