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LC 分析人员通常需要知道他们使用的液相柱的柱体积是多少。该值会在活化、平衡和方法开发的建议里用到。尽管该术语有时称为“总体积”,但通常指的是“空隙体积”或硅胶颗粒之间的流动相体积。关键是对间隙空间的测量,您可以通过将总柱体积乘以具体柱类型的典型填充效率的估算因子来估计死体积。
柱体积V怎么算?
对于全多孔LC色谱柱(Force、Roc、Ultra、Allure、Pinnacle DB、Pinnacle II 或 Viva 色谱柱)的公式如下:
V = πr2 x L x 0.68
对于表面多孔 (SPP) 液相色谱柱 (Raptor):
V = πr2 x L x 0.50
注:其中 L = 以厘米为单位的柱长,r = 以厘米为单位的柱半径
更常见的是通过注入含有已知在柱固定相上没有保留或保留可忽略不计的分析物的标准品来通过实验估计空隙体积,反相 HPLC 常使用尿嘧啶。应该注意的是,这种估计还受所用仪器的柱外死体积的影响,因此可能略有不同。
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