（图片来源：包图网）
一、适用范围
适用于片剂、胶囊、粉剂、功能性饮料类型保健食品中维生素B12的测定（该实验选用基质为功能性饮料）。
参考标准：《GB/T 5009.217-2008 保健食品中维生素B12的测定》
二、提取步骤
称取试样2g（精确至0.01g），于50mL具塞离心管中，加入10mL水，加入0.5mL乙腈，涡旋混匀，待净化。
三、净化步骤
SPE小柱：Welchrom® BRP，规格：60mg/3mL。
活化：5mL甲醇，5mL水，弃去；
上样：全部上样，弃去；
淋洗：5mL 5%乙腈水；
洗脱：0.5mL 25%乙腈水；
洗脱液加水至1mL，待测。
四、色谱条件
色谱柱：月旭Xtimate® C18，4.6×250mm，5μm。
流动相A：精密称取磷酸氢二钾0.87g，磷酸二氢钾0.41g，用水溶解后加乙腈125mL用水稀释至1000mL。
流动相B：水：乙腈：磷酸=499：499：2。
时间
流动相A
流动相B
0
100
013
100
0180
100
23
100
025
100
0
流速：1.2mL/min；
柱温：30℃；
进样量：20μL；波长：361nm。
五、色谱图或者加标回收率结果
图1. 维生素B12标准溶液 4mg/L图谱
表1、出峰情况
峰名称
保留时间
峰面积
峰高相对
峰面积
拖尾因子
塔板数
_
min
mAU*min
mAU
%EP
(USP)
维生素
B12
6.266
0.8547
5.32
100
0.92
10002
图2. 样品空白图谱
图3. 样加标2mg/kg图谱
表2、加标回收率表
目标物
名称
加标水平
mg/kg
平均回收率
%
RSD %
（n=2）
维生素B12
297
4.33
六、相关产品信息
货号名称规格
00522-
20009
SPE小柱
Welchrom® BRP，
60mg/3mL，50pk
00837-
05006
50mL螺口尖底
离心管
Welchrom® 离心管
一次性离心管，平盖，
锥形底，RCF12000xg，袋装，
未灭菌，50mL，50/包
00837-
05002
15mL螺口尖底
离心管
Welchrom® 离心管
一次性离心管，平盖，
锥形底，RCF12000xg，袋装，
未灭菌，15mL，50/包
00824-
31001
固相萃取装置
Welch 固相萃取装置，
12位方缸
00821-
32291
盖子+垫片
Welchrom® 预切口红色
特氟龙/白色硅胶隔垫，
9mm蓝色短螺纹开口盖
中心孔6mm 100pk
00821-
0927
样品瓶
Welchrom® 2mL 透明
短螺纹广口样品瓶
带书写处 11.6*32mm
一级水解玻璃 100pk
00101-21043
液相色谱柱
Xtimate® C18，
4.6×250mm，5μm
00826-
V049P025
维生素B12
标准品
A2S，CAS No.:
68-19-9，25mg
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