族特异亲和填料的自传

哈喽！大家好呀~欢迎大家走进我的世界。你也许猜不到我是谁吧？哈哈，没关系，给你几个小提示。我就像沙漠里的绿色生命，默默净化沙土，使人类不再受沙尘暴的困扰；我又像是一颗颗的活性炭粒子，你可以把我放到冰箱里，放到污水中，我可以净化异味杂质。别看我很渺小，但是在化学的世界里，我小小的身体却可以发挥大大的力量哦！说到这里，你也许猜到我是谁了吧？

是的，我就是族特异亲和填料，一种亲和配基。我不止能够结合一种分子，而是可以结合一个家族，或者具有同一性质的一类蛋白，这些蛋白往往具有相似的空间结构或者相似的生物功能。由于在层析纯化过程中易受到同种特征的杂质污染，因此可以利用我在纯化之前的样品准备或者纯化后期的精纯过程有效的去除一类杂质。

想知道在哪些方面需要用到我吗？那就继续往下看吧！

01

去除样品中的白蛋白和抗体

由于血清中白蛋白HSA和抗体IgG占总蛋白的约60%，因此如果从血清中提取目标蛋白，或者提取血清蛋白质组用于双向电泳或质谱等其他组学检测，需要首先除去样品中的白蛋白和抗体。HiTrap Albumin & IgG Depletion层析柱含有HSA结合蛋白和Protein G的配基，能够在温和条件下有效吸附样品中的白蛋白和抗体，不破坏目的蛋白的活性。1ml层析柱或者SpinTrap离心柱能够将150μL血清中的白蛋白和抗体去除90%以上。

02

去除蛋白酶

当用外源细胞胞内表达重组蛋白时，破碎细胞后，宿主蛋白酶将会释放，对目的蛋白进行降解，造成大量损失，加入蛋白酶抑制剂这种通常方法因抑制剂的稳定性具有很短的时效性，另外抑制剂本身对实验人员具有危害，可以将待纯化的初始样品通过Benzamidine配基的层析柱将样品中的蛋白酶进行吸附，稳定目的蛋白。亲和标签例如GST与目的蛋白之间的切除，通常会加入Thrombin或者Factor Xa 等丝氨酸蛋白酶，这种方式会引入蛋白酶的污染，通过苯甲脒层析柱，能够有效的将酶切产物中的蛋白酶去除。

03

去除糖基化组分

真核细胞作为表达体系，经常会将一部分表达的重组蛋白进行糖基化共价修饰，可以将样品通过Con A或者Lectin层析柱将糖基化的杂质或者糖基化的目的蛋白吸附，ConA和Lectin层析柱的配基是能够结合糖类组分的凝集素蛋白，有效吸附糖蛋白、多糖、糖脂。这种方法有时也用于对于抗体的糖基化定量检测，通过计算结合和流穿的蛋白量，测定糖基化的抗体的比例。此外血清中除了含有白蛋白和抗体之外，也含有大量的糖基化蛋白质组，也可以通过Con A层析柱去除。

04

去除游离核酸

在纯化转录因子，核酸酶等核酸结合蛋白时，目标蛋白在低盐条件可能会结合宿主的核酸，为了去除这种非特异性的核酸，某些核酸结合蛋白例如转录因子Oct-1可以在中盐条件下与宿主核酸解聚，通过Heparin层析柱捕获核酸结合蛋白，游离的宿主核酸流穿。因为Heparin层析柱的配基是肝素多糖，和核酸结合蛋白具有特异性的结合，后续可通过高盐浓度洗脱。