新柱启用前注意事项
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新购色谱柱使用之前:仔细阅读色谱柱使用说明,了解色谱柱的基本信息,如pH耐受范围、操作温度耐受范围、操作压力耐受范围、保存溶剂等信息,对该色谱柱的适用范围有个大概了解,以免后期使用不当导致损坏。
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新柱活化
新购色谱柱在使用之前,有必要进行活化操作,以便延长色谱柱的使用寿命,不同类型的色谱柱有不同的活化方法,下面就一些常规的液相色谱柱进行活化方法的介绍:
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常规反相色谱柱:如最常用的C18柱,先用甲醇或乙腈冲洗20-30倍的柱体积,然后再用流动相平衡10-30倍柱体积。(若使用含盐流动相,则需要使用含原有比例但不含盐的流动相进行中间过渡,以防色谱柱堵塞)
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正相色谱柱正相模式:采用正相色谱柱做正相色谱时,直接用流动相平衡20-30倍柱体积。
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正相色谱柱反相模式:如一些氨基柱、氰基柱,一般都是保存在正相流动相中,用于反相色谱分离模式时,需要先用过渡试剂进行过渡(因为正相溶剂和反相溶剂一般是不互溶的),如用异丙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积(过渡时需注意:异丙醇黏度大,为防止柱压过高导致色谱柱损坏,需用低流速进行过渡)。
日常使用及使用后冲洗
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为防止堵塞,样品及流动相均需过滤后再使用,必要的话可配合在线过滤器或保护柱使用。
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色谱柱用后及时冲洗:
1) 反相色谱柱:如C18柱,先用高比例水相冲洗20-30倍柱体积,然后可梯度降低水相比例、提高有机相比例(如甲醇或乙腈/水=50/50)冲洗20-30倍柱体积,最后保存在纯有机相中(如甲醇或乙腈中。(注意:若使用了含盐流动相,则需适当延长冲洗时间,以便将色谱柱内残留的含盐流动相冲洗干净)
2) 正相色谱柱正相模式:正相色谱柱的耐压限度一般较低,所以无论在使用时还是清洗时都要低流速起步。因不同正相柱保存溶剂可能稍有差异,所以其用后清洗和保存方法还需严格按照使用说明书来操作。
3) 正相色谱柱反相模式:如一些氨基柱、氰基柱,因高比例水相会加速氨基柱键合官能团的水解,所以一般不会用高比例水相进行氨基柱的冲洗,用后可直接用一定比例的有机相/水进行冲洗。冲洗后对于短时间保存可直接保存在反相有机相如乙腈中,若要长期保存,则需用异丙醇低流速过渡后保存在正己烷中。
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