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01
特异性
蛋白酶K具有广泛的底物特异性。即便存在洗涤剂的情况下，其仍可降解许多非变性状态的蛋白质。蛋白酶K分离自一种可在角质上生长的腐生真菌（Tritirachium album）。因此，蛋白酶K能够降解非变性状态的角质（头发），因而称为“蛋白酶K”[1]。其切割的主要位点为带有封闭氨基基团、邻近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽键。因其广泛的特异性，其较为常用[2,3,4]。
02
生理性质
蛋白酶K是稳定的S8家族丝氨酸碱性蛋白酶，在邻近活性位点组氨酸的位置含有两个二硫键和一个游离半胱氨酸[2,4]。
分子量
28,930 Da（氨基酸序列）[21]
28,500 Da （SDS-PAGE）[22]
PH范围
7.5-12.0（尿素变性后的血红素为底物），但多数情况下使用的pH范围为7.5-9.0[2,3]
温度曲线
最适活性温度37℃（20至60℃之间活性>最大活性的80%）[3]
PI: 8.92
消光系数
E1%=14.2（280 nm,10mM NaCl和5mM CaCl2，pH8.0）[2]
活化剂
活化需要1-5mM Ca2+。去除酶中的钙离子（加入EDTA）后，会丢失25%的催化活性。但如果通过凝胶过滤去除EDTA-Ca2+复合物，则会总计丢失80%的酶活性，仅在向不含Ca2+的酶中加入过量的Ca2+时，才会发生少量活化[23]。
蛋白酶K在1% TRITON™ X-100之中激活，并在0.5% (w/v) SDS之中完全激活。SDS和尿素会使蛋白质底物变性，提高消解速率。在这些试剂作用下，蛋白酶K自身的消解速率要慢得多[3,19,20]。
单位定义
在pH7.5、37℃下，每分钟可水解尿素变性的血红素，产生1.0mmole (181mg) 酪氨酸所需的酶量为一单位。
03
抑制剂
蛋白酶K的抑制剂为DIFP或PMSF（后者使用的终浓度为5 MM）[3]。EDTA只会使其部分失活，并不能起到抑制作用。蛋白酶K不会受到碘乙酸、胰蛋白酶特异性抑制剂TLCK、糜胰蛋白酶特异性抑制剂TPCK以及对-氯汞基苯甲酸盐抑制。
04应用
*线粒体分离
*核酸纯化产物的蛋白质消解。在分子生物学应用中，蛋白酶K常用于消解无用的蛋白质，例如从微生物、培养细胞和植物的DNA或RNA制剂中消解核酸酶[5-11]。在核酸制剂之中，这种酶的使用浓度通常为50-200µg/ml，pH7.5-8.0，37℃。孵育时间30分钟至18小时不等。尽管在长期孵育时，蛋白酶K可以自动消解，但通常还是通过后续的本分萃取法使其变性[3]
*蛋白酶K已经用于去除阳离子蛋白质上结合的内毒素，如溶菌酶和核糖核酸酶A上的内毒素[12]
*确定酶在膜上的分布[13]
*处理石蜡包埋的组织，以便暴露抗原结合位点进行抗体标记[14]
*去除核酸酶进行原位杂交[15]
*传染性海绵状脑病（TSE）朊病毒研究及草拟的诊断测试方法利用蛋白酶K消解来自大脑组织样本的蛋白质[16,17]
*采用蛋白酶K消解法进行蛋白酶足迹实验，去除蛋白质-蛋白质表面互作[18]
05
制备说明
蛋白酶K可溶于水（1mg/ml），获得无色透明的溶液。
06
溶解性和溶液稳定性
建议在-20℃下冻存粉末。产品可稳定保持至少2年。
蛋白酶K溶液在较广的pH范围内（4.0-12.5，最适pH8.0）保持稳定，同时在使用时可在25-65℃范围内保持稳定。pH8.0时，溶液至少可在4℃下稳定保存12个月[3]。pH4-11.5时，含有Ca2+ （1-6mM）的溶液预计可稳定保存数周。80%的硫酸铵悬液可在4℃下至少稳定保存12个月[2]。
07
产品列表
产品号
产品名称
规格
Cas
标准包装
P109033
蛋白酶K
冻干粉，≥30 units/mg protein
39450-01-6
25mg
100mg
500mg
1g5g
25g
100g
P128666
蛋白酶K 来源于林伯氏白色念球菌
≥20 units/mg dry weight
39450-01-6
25mg
100mg
1g
P301575
蛋白酶K 来源于林伯氏白色念球菌
≥500 units/mL, buffered aqueous glycerol solution
39450-01-6
1ml
5ml
25ml
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参考文献
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[23] IUBMB Enzyme Nomenclature:
http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/4/21/64.html
阿拉丁是A股科创板上市企业（股票代码：688179），同时也是科学服务领域集研发、生产和制造一体的高科技企业。公司业务涵盖高端化学、生命科学、分析色谱及材料科学四大领域的试剂和研发材料。公司自主打造“阿拉丁”品牌科研试剂和“芯硅谷”品牌实验耗材，主要依托自身电子商务平台（www.aladdin-e.com）实现线上销售。公司在上海建有64000平方米的研发和生产基地。同时在华东和华北拥有现代化物流仓库，另外华南、西南和华中的仓库正在建设中，预计2021年年中均将投入使用，这将优化客户体验，缩短客户的交货时间。
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