作者：Dr. Ivan Lebedev, Brian Rivera, Dr. Bryan Tackett
翻译：Grace Guo
概述：
尺寸排阻色谱 (SEC) 是一种基于生物大分子在溶液中的尺寸进行分离的技术，特别适用于定量分析生物大分子的尺寸变异和高分子量 (HMW) 聚集体。流速是大多数吸附性 LC 方法常用的方法参数之一。对于小分子来说，提高流速可能会增强分离。然而，SEC 是一种非吸附性的，独特的分离方式，较低的流速通常会提高分离度。实验数据表明，只需以较低的线速度运行，分离度就可以得到相当大的提高。
图1：
图1：在不同流速下运行 NIST mAb 的 SEC 色谱图叠加
图 1 展示了在较低流速下运行 NIST mAb（一种常见标准蛋白质）的聚集体分析方法得到的改善。对于单体和 HMW，0.4 mL/min 的分离度 (Rs) 为 2.97，0.35 mL/min 的 Rs 为 3.17，0.2 mL/min 的 Rs 为 3.42。具体结果请见表 1。
表1：
表1：调节流速的色谱结果总结
LC运行条件：
色谱柱：Biozen™ 1.8 μm dSEC-2, 200 Å
规格：300 x 4.6 mm
货号：00H-4787-E0
流动相：0.2M 磷酸二氢钾 + 250 mM KCl, pH 6.2
流速：如图所示
进样量：3 μL
温度：25 °C
检测器：UV @ 280 nm
样品：NIST mAb, 10 mg/mL
结论：
尽管该方法实际上需要两倍的时间，但由于分离度通常是满足系统适用性的要求的条件之一，较低流速值所带来的优异分离结果可能会提供更大的误差范围。因此，如果对于性能和方法稳健性的要求高于通量的要求，较低的流速是最容易实现且实用的方法参数之一。
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