全自动固相萃取-气相色谱-质谱法
测定生活饮用水中乙草胺的残留量
乙草胺是一种在世界范围内广泛应用的除草剂，也是目前我国使用量最大的除草剂之一。具有杀草谱广、效果突出、价格低廉和施用方便等优点。研究表明，乙草胺具有明显的环境激素效应，能够造成动物和人的蛋白质、DNA 损伤，脂质过氧化，对低等脊椎动物、浮游生物和中小型环节动物表现出较强的急性毒性，对人体健康以及环境安全存在着较大的威胁。水专项全国调查数据显示，乙草胺在我国主要水厂的检出率为61%。因此，GB 5749-2022 生活饮用水卫生标准将其列为新增检测指标之一。
本文参考新版GB/T 5750.9征求意见稿中的前处理方法，采用睿科全自动固相萃取仪Fotector Plus实现对生活饮用水中乙草胺的快速富集和洗脱，然后用睿科Auto EVA 80全自动氮吹浓缩仪进行浓缩，外标法定量。在0.1 ug/L的加标水平下，乙草胺的回收率在88%-98%之间，RSD值小于5%。说明本方法可以满足生活饮用水中乙草胺的快速检测。
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仪器、耗材与试剂
仪器
睿科Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪
睿科EVA 80高通量全自动平行浓缩仪
Agilent 7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪
耗材
C18固相萃取柱（RayCure，500 mg/6mL，
货号：RC-204-16004）
试剂
甲醇（优级纯）、二氯甲烷（优级纯）
乙酸乙酯（优级纯）、超纯水
抗坏血酸（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）
Fotector Plus
固相萃取仪
EVA 80
平行浓缩仪
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样品制备
采样时，每升水样中加入约100 mg抗坏血酸，以去除余氯。如水样较为浑浊，则水样中的颗粒物会堵塞固相萃取柱降低萃取速率，可使用0.45μm水系滤膜过滤水样。
2.1富集
依次用5 mL二氯甲烷、5 mL乙酸乙酯、10 mL甲醇和10 mL超纯水对固相萃取柱进行活化，活化速度为5 mL/min。准确量取500 mL水样，加入10 mL甲醇助溶，以15 mL/min的流速通过固相萃取柱富集，上样完毕后用氮气以25 psi的压力将柱子吹干25分钟。用3 mL乙酸乙酯洗脱固相萃取柱，流速为1 mL/min，并浸泡5 min。之后再用3 mL二氯甲烷洗脱固相萃取柱，流速为1 mL/min，继续浸泡5 min。收集全部洗脱液于玻璃试管中。具体方法如下图所示。
2.2固相萃取条件
●全自动固相萃取仪：Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪
●固相萃取柱：C18固相萃取柱（RayCure，500mg/6mL）
●活化：二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、超纯水
●洗脱：二氯甲烷，乙酸乙酯
Fotector Plus固相萃取方法
2.3
将洗脱液用睿科Auto EVA 80全自动氮吹浓缩仪在45 ℃条件下浓缩至1 mL，涡旋混匀，转移至进样小瓶上GC/MS分析。
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气质联用检测条件
采用SIM模式进行定性分析，选择离子见表-1。GC-MS检测条件：进样口温度280 ℃，不分流进样，进样量2.0 μL；载气为高纯氦气，恒流模式；电子轰击电离源（EI），离子源温度230 ℃，接口（传输线）温度280 ℃，质量分析器温度150 ℃，溶剂延迟时间10 min。
色谱柱
HP-5MS 30m*0.25mm*0.25μm
进样口温度
280 ℃
柱流速
1 mL/min
进样量
2 μL
初始温度
85 ℃
阶升
以20 ℃/min速度升温至165 ℃，保持2 min；以5 ℃/min速度升温至220 ℃，再以50 ℃/min速度升温至280 ℃，保持2 min
进样方式
不分流进样
载气
高纯氦气，恒流模式
MSD传输线辅助加热
280℃
离子源温度
230℃
四级杆温度
150℃
模式
SIM
溶剂延迟
10 min
表-1.目标化合物的定量离子和定性离子
化合物名称
保留时间
定量离子
定性离子
乙草胺
12.695
146
162，174
标准溶液总离子流图（50 ng/mL）
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结果与讨论
为了验证该方法的回收率，本实验向纯水样品(500 mL)加入乙草胺标准品（0.05 ug）进行加标回收验证(n=3)，数据如表-2所示。加标回收率在88%-98%之间，RSD值控制在5%以内。说明该方法能够很好地运用于生活饮用水中乙草胺的检测。
表-2.纯水样品的加标回收率及RSD值（n=3）
化合物
回收率（%）
平均回收率(%)
RSD(%)
样品-1
样品-2
样品-3
乙草胺
88.2
97.1
93.0
92.8
4.8
5总结
乙草胺在水中的溶解度很低，在做加标实验时使用的标液建议用甲醇稀释，并在水样中加入一定量的甲醇或丙酮助溶以减少瓶壁黏附；
查阅文献发现pH增大会增强乙草胺的降解效率，建议水样在中性条件下进行萃取；
洗脱过程中流速不宜过快，应控制在1 mL/min以内，并使洗脱溶剂充分浸泡SPE小柱以保证目标物被充分洗脱。
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