中药木香
33种农残测定分析
木香为菊科植物木香的干燥根，含大量油脂类成分。这些成分对GC/MS/MS色谱柱污染较为严重，易造成目标保留时间漂移和丢峰，常规的固相萃取法一、固相萃取法二、固相萃取法三都不能很好的净化。因此纳谱分析根据木香油脂成分特点，在优化填料的同时优化了木香的提取方式。优化后的方案可以有效地减轻木香GC/MS/MS分析中存在的问题，降低了样品中油脂成分对色谱柱的污染和基质效应。
今天，我们来看看木香项目的前处理效果吧~
适用范围
本方法参考中国药典2020版2341第五法中的快速样品处理法（QuEChERS）法。
实验步骤
一
对照品溶液的配制
1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。
1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取木香空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。
二
供试品溶液的制备（QuEChERS法）
2.1
GC-MS/MS样品
2.1.1
提取
取木香粉末（过3号筛）3 g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入水15 mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30 min，精密加入乙腈15 mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5 min，加入QS-002盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3 min，于冰浴中冷却10分钟，离心（4000转/分）5分钟，待净化。
2.1.2
净化
SPE净化管：Q-15A06 SelectCore QuEChERS净化管15 mL, Pesticide Residue A06（含色素挥发油中药农残Q法）
净化：取上述提取液上清液9 mL置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化完全，离心（4000转/分）5分钟，即得。
2.1.3
分析
GC-MS/MS测定：精密吸取上清液1 mL，置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm滤头，上机分析。
2.2
LC-MS/MS样品
2.2.1
提取
取木香粉末（过3号筛）3 g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15 mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30 min，精密加入乙腈15 mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟，加入QS-002盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心（4000转/分）5分钟，待净化。
2.2.2
净化
Q法净化管：Q-15A06 SelectCore QuEChERS净化管15 mL, Pesticide Residue A06（含色素挥发油中药农残Q法）
净化：取上述提取液上清液9 mL置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化完全，离心（4000转/分）5分钟，即得。
2.2.3
分析
LC-MS/MS测定：精密吸取上清液5 mL，置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm滤头，上机分析。
三
气相色谱-串联质谱法
（岛津 GC-MS -TQ8040 NX）
色谱条件
色谱柱：NanoChrom BP-50+MS, 30 m×0.25 mm×0.25 μm;
进样口温度：250 ℃；
升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；以10 ℃/min升温至160 ℃；再以2 ℃/min升温至230 ℃，最后以15 ℃/min升温至300 ℃，保持6 min；
载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；
进样方式：不分流进样；
恒压模式：146 kPa；
进样量：1 μL。
质谱条件
电离方式：电子轰击电离源（EI）；
电离能量：70 Ev；
接口温度：250 ℃；
离子源温度：250 ℃；
监测方式：多反应监测模式（MRM）；
溶剂延迟：10 min。
GC/MS/MS监测目标物注意事项：样品浓度为0.2 g/mL；前加标建议加300 μL混合对照品提取，浓度为标准曲线第二个浓度点浓度（20 μL/mL）。由于样品浓度较低，建议分析前重新调谐检查灯丝能量后再进行分析，仪器灵敏度过低可能导致对硫磷丢峰或分析结果不准确。
氟虫腈和氟虫腈亚砜 保留时间往后漂移1.8 min左右（参考）
四
高效液相色谱-串联质谱法
（岛津 LC-MS 8045）
色谱条件
色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides, 2.6 μm,2.1×100 mm
流动相：
A：0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）
B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）=95:5
流速: 0.3 mL/min
柱温: 40 ℃
进样量: 2 µL
梯度：
时间
（min）
流速
（mL/min）
流动相A
（%）
流动相B
（%）
0
0.3
70301
0.3
703012
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
703016
0.3
7030
质谱条件
离子源: 电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描
监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）
离子源接口电压：4.5 kV
雾化气：氮气3.0 L/min
加热气：干燥空气10.0 L/min
DL温度：250 ℃
加热模块温度：400 ℃
接口温度：300 ℃
干燥气：N2 10 L/min
LC/MS/MS监测目标物注意事项：地虫硫磷、治螟磷 参考GC/MS/MS结果；
目标物
定量离子
CE电压
参考离子
CE电压
保留时间（参考）
水胺硫磷
291.00>231.00
-15
291.00>121.00
-30
5.106
挥发油基质样品自动进样器托盘温度不宜过低，否则个别样品会出现分层，导致分析结果不准确，建议20 ℃为宜。
表1 木香中33种农药残留的测定添加回收结果（%）
五
处理后溶液的颜色比对
木香基质加标GC/MS/MS部分化合物分析结果对比
a-硫丹（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）
β-六六六（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）
δ-六六六（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）
p,p''-三氯杀螨醇（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）
γ-六六六（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）
对硫磷（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）
甲基对硫磷左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化
水胺硫磷左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化
木香基质加标GC/MS/MS地虫硫磷出峰情况
木香基质加标LC/MS/MS部分化合物分析结果对比
水胺硫磷左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化
六
实验讨论
通过以上实验对比数据可以看出，上述方案搭配SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管净化后的木香样品溶液颜色较浅，且各化合物出峰较为良好，目标物保留时间漂移也得到了有效减弱，减少了污染GC/MS/MS柱前端的风险。SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管针对木香中油脂类成分去除效果良好，联合上述解决办法有效地提高了实验效率，也为木香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。
中药农残相关实验耗材
方法类别
推荐产品
货号
适用品种
快速样品
处理法
（QuEC-hERS）
SelectCore QuEChERS萃取盐包
6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg
QS-002
川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类
SelectCore QuEChERS净化管
15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg
Q-15PCSG01
注意事项：
前处理步骤较多，提取效率较为充分，溶液颜色较深，基质标每次只能一个点
加入盐包时会放热，注意冰浴降温
对杀虫脒有吸附，回收率可能偏低
SelectCore QuEChERS净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg
Q-15A06
木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类
注意事项：
改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质
SelectCore QuEChERS净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg
Q-15A07
丹参专用
注意事项：
改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性
固相萃取方法
一
SelectCore QuEChERS净化管
15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg
Q-15PC04
基质简单，色素较少如：人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉
注意事项：
适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品，对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强
固相萃取方法
二
SelectCore HLB固相萃取柱
200mg/6mL; 30/pkg
HLB060-060200-1
紫草、北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类
注意事项：
吸附色素能力相比固相1要好，对滴滴滴类化合物吸附力较强故GCMSMS样品分析不适用，多用于LCMSMS样品净化
SelectCore HLB-A中药农残专用柱
200mg/6mL; 30/pkg
HLBA60-060200-1
千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、厚朴、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目
注意事项：
对磺隆类化合物吸附力强，且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用，故LCMSMS样品分析不适用，GCMSMS样品分析需5mL样品上柱净化
SelectCore HLB-B中药农残专用柱
200mg/6mL; 30/pkg
HLBB60-060200-1
色素较多，挥发油较多如：火麻仁、菟丝子、厚朴、酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归
注意事项：
对滴滴滴类化合物具有一定吸附性，适用于LCMSMS样品分析，3mL样品上柱净化
SelectCore HLB-C中药农残专用柱
500mg/6mL; 30/pkg
HLBC60-060500-1
血竭、补骨脂、吴茱萸、沉香、没药、蛇床子、火麻仁、小茴香、马钱子等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目
适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药，GCMSMS样品分析需2mL样品上柱净化
固相萃取方法三
SelectCore GCB/NH2-II固相萃取柱
500mg/500mg/6mL; 30/pkg
GN100-061000-2
色素含量多，含少量挥发油如：金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶
注意事项：
洗脱液中有甲苯，毒性较大，且洗脱时间较长；
对磺隆类农药有一定吸附LCMSMS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据
SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱
500mg/500mg/6mL; 30/pkg
GNA100-061000-1
紫草、黄连、黄柏、何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等
注意事项：
适用于干扰较为严重的GCMSMS样品分析。如若用于LCMSMS样品分析，应联合其他净化方式
液相色谱柱
ChromCore C18-MS Pesticides2.6 μm, 2.1×100 mm
S013-026018-02110S
气相色谱柱
NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25 μm
G5025-3002
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