【应用分享】中药款冬花的33种农残测定分析

纳谱分析

2022.9.21

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图

款冬花（图片源于网络，侵删）

款冬花为菊科植物款冬的干燥花蕾，含有较多的色素类、挥发油类成分，这些成分会造成农残分析中个别目标物干扰较大、无法准确定性等问题，其中地虫硫磷干扰较为明显。针对花类含有色素和挥发油的项目，我们推荐固相萃取法二和固相萃取法三结合净化，效果较好。

今天，我们来看看款冬花项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的固相萃取法二和固相萃取法三，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。

实验步骤

一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二 / 供试品溶液的制备（直接提取法）

提取：精密称取5 g样品（3号筛），加氯化钠1 g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50 mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5 mL，加乙腈定容至10 mL，摇匀，待净化。

三 / 净化

GC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore GCB/NH₂-II 固相萃取柱500mg/500mg/6mL

净化：取SelectCore GCB/NH₂-II 固相萃取柱用乙腈：甲苯（3:1）10 mL活化，量取上述款冬花提取液2 mL，置已活化的SelectCore GCB/NH₂-II 固相萃取柱中，用乙腈：甲苯（3:1）20 mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，40 ℃水浴减压回收至2 mL，即得。

GC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL，氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

LC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore HLB 固相萃取柱200mg/6mL

净化：量取上述款冬花提取液3 mL，过SelectCore HLB固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。

LC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法（岛津GC-MS-TQ8040 NX）

4.1 色谱条件

色谱柱：NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度：250 ℃

升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；

以10 ℃/min升温至160 ℃；

再以2 ℃/min升温至230 ℃;

最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒压模式：146 kPa；

进样量： 1 μL

4.2 质谱条件

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70 Ev；

接口温度：250 ℃；

离子源温度：250 ℃；

监测方式：多反应监测模式（MRM）；

溶剂延迟：10.0 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法（岛津LC-MS 8045）

5.1 色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm, 2.1×100mm;

流动相：

A：0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)

B：乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95:5

流速：0.3 mL/min

柱温：40 ℃

进样量：2 µL

梯度：

时间 (min)	流速 (mL/min)	流动相A (%)	流动相B (%)
0	0.3	70	30
1	0.3	70	30
12	0.3	0	100
14	0.3	0	100
14.1	0.3	70	30
16	0.3	70	30

5.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

监测方式：多反应监测模式（MRM）

离子源接口电压：4.5 kV

雾化气：氮气3.0 L/min

加热气：干燥空气10.0 L/min

DL温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度：300 ℃

干燥气：N₂ 10 L/min

六 / 注意事项

由于款冬花基质复杂，在LC-MS/MS分析中地虫硫磷存在较大干扰无法准确判定，故选用GC-MS/MS来检测款冬花中地虫硫磷的残留结果，GC-MS/MS检测地虫硫磷条件如下表所示。

七 / 实验结果

款冬花基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

款冬花基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

表1 款冬花中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

八 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出，款冬花使用SelectCore GCB/NH₂-II 固相萃取柱处理对其色素类成分吸附良好，有效地避免了样品中色素成分对GC-MS/MS柱前端的污染；使用SelectCore HLB 固相萃取柱处理的款冬花LC-MS/MS样品液中干扰较少，搭配上述解决办法有效地解决了款冬花农残检测中地虫硫磷存在的问题，提高了实验效率，为款冬花的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

中药农残相关实验耗材：

方法类别	推荐产品	货号	适用品种
快速样品处理法（QuEC-hERS）	SelectCore QuEChERS 萃取盐包 6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg	QS-002	川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类
	SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg	Q-15PCSG01
	注意事项：前处理步骤较多，提取效率较为充分，溶液颜色较深，基质标每次只能一个点，加入盐包时会放热，注意冰浴降温对杀虫脒有吸附，回收率可能偏低
	SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg	Q-15A06	木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类
	注意事项：改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质
	SelectCore QuEChERS 净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg	Q-15A07	丹参专用
	注意事项：改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性
固相萃取方法1	SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg	Q-15PC04	基质简单，色素较少如：人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉
	注意事项：适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品，对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强
固相萃取方法2	SelectCore HLB固相萃取柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLB060-060200-1	紫草、北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类
	注意事项：吸附色素能力相比固相1要好，对滴滴滴类化合物吸附力较强故GC-MS/MS样品分析不适用，多用于LC-MS/MS样品净化
	SelectCore HLB-A中药农残专用柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLBA60-060200-1	千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、厚朴、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目
	注意事项：对磺隆类化合物吸附力强，且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用，故LC-MS/MS样品分析不适用，GC-MS/MS样品分析需5mL样品上柱净化
	SelectCore HLB-B中药农残专用柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLBB60-060200-1	色素较多，挥发油较多如：火麻仁、菟丝子、厚朴、酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮s、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归
	注意事项：对滴滴滴类化合物具有一定吸附性，适用于LC-MS/MS样品分析，3mL样品上柱净化
	SelectCore HLB-C中药农残专用柱 500mg/6mL; 30/pkg	HLBC60-060500-1	血竭、补骨脂、吴茱萸、花椒、姜黄、莪术、红花、连翘、青蒿、辛夷、香附、沉香、降香、檀香等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目
	适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药，GC-MS/MS样品分析需2mL样品上柱净化
固相萃取方法3	SelectCore GCB/NH₂-II 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL; 30/pkg	GN100-061000-2	色素含量多，含少量挥发油如：金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶
	注意事项：洗脱液中有甲苯，毒性较大，且洗脱时间较长；对磺隆类农药有一定吸附LC-MS/MS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据
	SelectCore GCB/NH₂-A 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL; 30/pkg	GNA100-061000-1	紫草、黄连、黄柏、何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等
	注意事项：适用于干扰较为严重的GC-MS/MS样品分析。若用于LC-MS/MS样品分析，应联合其他净化方式
液相色谱柱	ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm, 2.1×100mm		货号： S013-026018-02110S
气相色谱柱	NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25μm		货号： G5025-3002