Nature | “魔改”后的T细胞具有更持续更强的杀伤力

TCR-T，CAR-T等细胞治疗是目前很有前途的肿瘤疗法，是将患者自身的T细胞进行改造得来，但是狡猾的肿瘤细胞不会束手就擒，T细胞在杀伤肿瘤细胞过程中会衰竭，杀伤能力大大减弱。最新的一篇《Nature》文章通过改造T细胞的基因，对T细胞充能，使其具备持续杀伤肿瘤细胞的能力，而且击杀效率更高^[1]！

这篇文章用的主流技术就是Incucyte® 实时活细胞分析系统，对T细胞体外杀伤活性做了全面分析：

将CRISPR基因编辑后的T细胞用CFSE染色，加入各种免疫抑制剂或者Treg细胞（一种可以负调节T细胞活性的细胞），通过FACS筛选能提高T细胞增殖活性的基因，发现RASA2敲除的T细胞在所有免疫制剂存在下仍具有增殖活性。Sartorius的iQue® 高通量流式细胞仪（点击查看产品手册）非常适合这个筛选工作。

为了验证敲除RASA2基因的T细胞活性，作者构建了CD19阳性和NY-ESO- 1阳性的肿瘤细胞，目前T细胞治疗手段主要是TCR-T和CAR-T，作者同时构建了针对CD19和NY-ESO-1的CAR（嵌合抗原受体）和TCR（T细胞受体），并用Incucyte® 测试了TCR-T和CAR-T在各种免疫抑制剂和Treg细胞存在下的杀伤活性。

作者构建了不同CD19+表达水平的Nalm6肿瘤细胞，并将anti-CD19的CAR基因转染到RASA2敲除的T细胞建立针对CD19的CAR-T细胞疗法。继续用Incucyte® 检测CAR-T的细胞杀伤活性，发现RASA2 KO的T细胞通过提高对靶点表达量敏感度来增加杀伤作用。

体外细胞杀伤往往只有几天时间，为了检测T细胞的持续杀伤效果，作者进行了6轮杀伤，每次杀伤持续72小时。

CAR-T细胞杀伤实验发现即使在第六轮（Last Stim），与对照相比，RASA2 KO的T细胞杀伤作用依然明显。

培养箱内可长达数周的连续观察，最短几分钟间隔拍摄，减少人力，防止过多操作对细胞的伤害；这篇文章最长做了共计18天的六轮杀伤实验，每隔2-3小时自动拍摄。

6个板位，分别独立设置检测程序，可以兼容各种孔板和培养皿，通量高；这篇文章有各种免疫抑制剂、效靶比等实验组，Incucyte® 一次可以完成所有实验组实验。

高效简便的模块化软件设置和数据分析，输出图片、视频、生长曲线等多指标多参数；本文主要用到荧光计数并归一到第一时间点等功能。

大于100种优化过的活细胞专用荧光试剂、耗材及详尽的Protocol。本文用了配套的Annexin V试剂。

如果您不想再把细胞拿进拿出的拍摄，来试试Incucyte® 吧！

-参考文献-

RASA2 ablation in T cells boosts antigen sensitivity and long-term function.Nature 2022