大阪曹達|三耀精细
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《化妆品安全技术规范 2022年版》(征求意见稿)中部分检测项目较2015版有变更和新增,今天的推送中介绍了大曹三耀实验室使用征求意见稿中的方法对α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚的分析数据。
下列五项的数据请
2.2米诺地尔和坎利酮
2.13 丙烯酰胺
2.14 地氯雷他定等15种原料
2.17 普鲁卡因胺等7种原料
2.27 西咪替丁
α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚
α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚,这四种物质均具有美白的功效,其中α-熊果苷、β-熊果苷为一对差向异构体。
使用CAPCELLPAKC18MGIIIS5;4.6×250色谱柱参考规范中的分析方法,可得到标准品和乳液、化妆水样品的良好分析结果。另外,根据α-熊果苷、β-熊果苷的化学性质,使用键合金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME-HR(金刚烷键合)色谱柱,在相同液相条件下能得到更好的分离效果,分析结果如图1所示。
图1 C18 MGIII和ADME-HR色谱柱
α-熊果苷、β-熊果苷对照品分析结果对比图
【色谱条件】
色谱柱:CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250
CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250
流动相:水 / 甲醇 = 95 / 5
流速:0.5 mL/min
柱温:20 °C
检测:激发波长:292;发射波长:337
样品:α-熊果苷20μg/mL,β-熊果苷10μg/mL (溶剂为甲醇)
进样量:5 μL
CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250
标准品分析
图2 MGIII色谱柱分析结果-标准溶液
1.β-熊果苷 2.α-熊果苷 3.氢醌 4.苯酚
表1 MGIII色谱柱标准溶液积分结果表
【色谱条件】
色谱柱:CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250
流动相:A,水;B,甲醇
B% 5%(0min)-5%(21min)-45%(22min)-50%(43min)-50%(48min)-100%(48.1min)-100%(50min)-5%(50.1min)-5%(60min)
流速:0.5 mL/min
柱温:20 °C
检测:α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292,发射波长为337;氢醌的激发波长为298,发射波长为345;苯酚的激发波长为:280,发射波长为318
样品:α-熊果苷2μg/mL,β-熊果苷2μg/mL,氢醌0.2μg/mL,苯酚0.4μg/mL (溶剂为甲醇)
进样量:5 μL
标准曲线
用甲醇将固体标准品溶解稀释配制成标准工作溶液,浓度依次由低向高进样测定,以峰面积-浓度作图,绘制标准工作曲线。标准曲线在浓度范围内线性良好,线性系数r的范围为0.9997~1.0000,测试结果如表2所示。
表2 α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚的
线性方程、线性范围和相关系数
回收率
按照规范方法分别对化妆水和乳液样品进行加标回收实验,α-熊果苷和β-熊果苷添加量为20μg,氢醌添加量为2μg,苯酚添加量为4μg。对样品和加标样品进行分析,计算得到回收率结果,分析谱图如图3和图4所示。化妆水样品和乳液样品加标回收率范围为91.3%~108.9%,回收率良好。
图3 化妆水样品和化妆水加标样品分析图
1.β-熊果苷 2.α-熊果苷 3.氢醌 4.苯酚
图4 乳液样品和乳液加标样品分析图
1.β-熊果苷 2.α-熊果苷 3.氢醌 4.苯酚
【色谱条件】
色谱柱:CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250
流动相:A,水;B,甲醇
B% 5%(0min)-5%(21min)-45%(22min)-50%(43min)-50%(48min)-100%(48.1min)-100%(50min)-5%(50.1min)-5%(60min)
流速:0.5 mL/min
柱温:20 °C
检测:α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292,发射波长为337;氢醌的激发波长为298,发射波长为345;苯酚的激发波长为:280,发射波长为318
样品:称取样品1.0g(精确到0.001g),置10mL具塞比色管中,加入甲醇至10mL,在涡旋混匀器上高速振荡30s,使样品与提取溶剂充分混合。密塞,超声提取20min,静置至室温,取适量样品溶液离心(转速14000r/min)5min,取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为待测溶液。必要时用适量甲醇稀释。
进样量:5 μL
CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250
标准品分析
按照规范方法,用色谱柱CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250对标准品进行分析时α-熊果苷和β-熊果苷在ADME-HR色谱柱上的保留时间较长,和氢醌峰接近,所以原梯度方法不适合此款色谱柱,在规范方法基础上对色谱条件进行调整,使目标峰能够良好分离。分析结果如图5所示,α-熊果苷和β-熊果苷的分离度为3.58。
图5 ADME-HR色谱柱分析结果-标准溶液
1.β-熊果苷 2.α-熊果苷 3.氢醌 4.苯酚
表3 ADME-HR色谱柱标准溶液积分结果表
【色谱条件】
色谱柱:CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250
流动相:A,水;B,甲醇
B% 13%(0min)-13%(15min)-45%(15.1min)-49%(35min)-49%(36min)-100%(36.1min)-100%(40min)-13%(40.1min)-13%(50min)
流速:0.5 mL/min
柱温:30 °C
检测:α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292,发射波长为337;氢醌的激发波长为298,发射波长为345;苯酚的激发波长为:280,发射波长为318
样品:α-熊果苷2μg/mL,β-熊果苷2μg/mL,氢醌0.2μg/mL,苯酚0.4μg/mL (溶剂为甲醇)
进样量:5 μL
标准曲线
用甲醇将固体标准品溶解稀释配制成标准工作溶液,浓度依次由低向高进样测定,以峰面积-浓度作图,绘制标准工作曲线。标准曲线在浓度范围内线性良好,线性系数r的范围为0.9998~0.9999,测试结果如表4所示。
表4 α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚的
线性方程、线性范围和相关系数
回收率
按照规范方法分别对化妆水和乳液样品进行加标回收实验,α-熊果苷和β-熊果苷添加量为20μg,氢醌添加量为2μg,苯酚添加量为4μg。对样品和加标样品进行分析,计算得到回收率结果,分析谱图如图6和图7所示。化妆水样品和乳液样品加标回收率范围为88.4%~99.9%,回收率较好。
图6 化妆水样品和化妆水加标样品分析图
1.β-熊果苷 2.α-熊果苷 3.氢醌 4.苯酚
图7 乳液样品和乳液加标样品分析图
1.β-熊果苷 2.α-熊果苷 3.氢醌 4.苯酚
【色谱条件】
色谱柱:CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250
流动相:A,水;B,甲醇
B% 13%(0min)-13%(15min)-45%(15.1min)-49%(35min)-49%(36min)-100%(36.1min)-100%(40min)-13%(40.1min)-13%(50min)
流速:0.5 mL/min
柱温:30 °C
检测:α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292,发射波长为337;氢醌的激发波长为298,发射波长为345;苯酚的激发波长为:280,发射波长为318
样品:称取样品1.0g(精确到0.001g),置10mL具塞比色管中,加入甲醇至10mL,在涡旋混匀器上高速振荡30s,使样品与提取溶剂充分混合。密塞,超声提取20min,静置至室温,取适量样品溶液离心(转速14000r/min)5min,取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为待测溶液。必要时用适量甲醇稀释。
进样量:5 μL
综上,参考《化妆品安全技术规范 2022年版》(征求意见稿)中的方法,使用CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250色谱柱可以得到α-熊果苷、β-熊果苷较好的分离,目标峰线性,回收率良好。
使用CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250色谱柱,对规范方法进行调整后,可得到良好分析结果,线性、回收率良好,同时α-熊果苷和β-熊果苷的分离度可达到3.58,并缩短了测试时间。
α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚 推荐用柱
F92635 CAPCELL PAK C18 MGIII S3; 2.0×150
F93375 CAPCELL PAK ADME-HR S5; 4.6×250
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