大咖讲座丨MALDI-TOF质谱技术在真菌鉴定和药敏分析中的应用和探索

4月27日，由上海市微生物学会临床微生物学专业委员会和华东地区侵袭性真菌感染协作组联合主办，同济大学附属东方医院和浙江大学医学院附属第一医院承办的 “第十届侵袭性真菌感染实验诊断技术规范化暨第五届ECIFIG技能培训班”在杭州盛大开幕。

会议现场照片

融智生物与合作伙伴硕世生物特邀专家——同济大学附属东方医院检验科主任吴文娟教授，在4月27日下午，就《MALDI-TOF质谱技术在真菌鉴定和药敏分析中的应用和探索》为主题，作精彩报告。

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吴文娟教授围绕临床真菌感染的“精准诊治之路”展开介绍，随着现代医学技术的发展，临床真菌检测出现的新技术——MALDI-TOF MS技术，可简化样本前处理流程，实现丝状真菌、分枝杆菌等难检菌的精准检测。

其关键技术为数据库，融智生物QuanID微生物鉴定质谱系统建库过程：

先查找基因序列，然后翻译成蛋白信息，挑选保守稳定的核糖体蛋白并建好数据库。

用质谱采集标准菌株获得的蛋白谱进行数据库验证。

QuanID建库过程

通过对数据库的不断拓展，增加了鉴定菌种的种类和数量，提升了微生物实验室菌种的鉴定能力；通过提升仪器性能，质谱数据重现性显著提高，得以鉴别常规微生物质谱无法鉴别的相似谱图的微小差异。

核酸质谱技术是质谱技术与PCR技术的完美结合，其用于念珠菌耐药基因检测具有简便、靶向性强、最大程度降低生物信息学分析要求等优势，其原理是：

根据靶向序列(目标位点)设计引物，样品经过多重PCR扩增

扩增产物用特异性的质量探针进行延伸反应，质量探针延伸反应中会结合不同的碱基

延伸反应前后的分子量会存在差异，利用核酸质谱对质量灵敏度高的特点，区别开延伸前后分子量的差异，从而得到检测分型结果

利用核酸质谱技术进行耐药基因检测研究，支持单反应孔内进行超过40个位点的检测，且重复性好、解读便捷、成本低，其检测出的基因突变位点与一代测序结果比较十分接近。吴文娟教授表示这项研究非常有意义，核酸质谱技术在细菌耐药方面的应用值得继续探索。