早在上世纪90年代就发现体内γδ T细胞水平偏高的急性淋巴瘤患者预后更好(5-year OS 70.8% vs 19.6%) [1], 自2017年CAR T 细胞疗法成功以来，γδ T细胞也逐渐受到更多的关注。
T细胞有两种类型：αβ T细胞和γδ T细胞。目前在细胞治疗中走在最前端的CAR T细胞就是αβ T细胞。而γδ T细胞仅占所有T细胞群体的很小一群（0.5%-5%），区别于αβ T细胞，它的TCR链由γ和δ链组成，通常不表达CD4和CD8。人外周血中主要的γδ T细胞亚群是Vγ9Vδ2 T细胞，这类γδ T细胞并不识别多肽抗原，而是通过BTN2A1和BTN3A1来识别phosphoantigens (PAgs)，有效地杀灭肿瘤和病原体。Vγ9Vδ2 T细胞也是目前γδ T细胞疗法中应用最多的一类细胞亚群。
当前免疫细胞治疗虽然取得了重大的突破，但以αβ T细胞为主的CAR T细胞疗法在实体瘤治疗和异体使用方面受限。而γδ T细胞和αβ T细胞一样也可以发挥细胞毒性，但是γδ T细胞没有MHC限制性，更具有组织趋向性，相应的免疫相关副作用也低，因此γδ T细胞具备通用型细胞治疗以及实体瘤治疗产品所需的特质。
γδ T细胞疗法发展现状
目前基于γδ T细胞的疗法不管在血液瘤还是实体瘤都有不少企业布局。国外企业的研发进展较快，其中 TC Biopharm的OmnImmune(TCB008)目前已进入二期临床，另外IN8bio的临床数据也比较乐观而且并没有二级以上的不良反应出现。国内方面，瑞创，博生吉、森朗、传奇生物、暨德康民、佳德和以及清辉联诺等均有布局，除了瑞创的RC1012已进入临床阶段外其他均处于临床前研发阶段。从目前的临床结果来看γδ T细胞疗法展现出了较好的疗效和安全性，因此γδ T细胞作为天然的通用型细胞产品不管在实体瘤和血液瘤的发展都值得期待。
攻克前列腺癌骨转移瘤
前列腺癌作为男性最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率正逐步升高，严重威胁我国男性健康。早期前列腺癌通常无症状，部分晚期患者因骨痛而就诊，高达90%的前列腺癌患者会出现骨转移。前列腺癌骨转移目前尚无统一的治疗方案，针对现阶段诊疗状况，多采取学科综合治疗（MDT）模式对肿瘤患者展开个体化治疗，进一步提高患者生活质量及延长患者生命。
共轭二磷酸盐（nBPs）如唑来膦酸盐zoledronate (ZOL)是恶性肿瘤骨转移的基础用药，可减少和推迟mCRPC骨转移患者的骨相关事件发生，同时ZOL在骨骼中将导致异戊烯焦磷酸（IPP）的积累，IPP作为γδ T细胞的磷酸抗原提高其识别能力。同时超过90%的前列腺癌以及超过99%的前列腺癌骨转移瘤表达前列腺干细胞抗原（PSCA），因此将靶向PSCA的CAR整合到γδ T细胞可以提高识别肿瘤能力并增强靶向性。
这种治疗策略由美国H. Lee Moffitt癌症中心的科学家提出，用于治疗前列腺骨转移患者，其临床前研究数据发表在Science Advances，后期有望做到快速临床转化来治疗化疗和去势治疗失败的前列腺癌骨转移患者。
图1. CAR 结构的筛选与确定
由于γδ T细胞的天然抗病毒特性，使得γδ T细胞较αβ T细胞的转导工艺困难。研究者利用腺病毒将传统二代CAR结构转导到Vγ9Vδ2 T细胞，同时利用αβ T细胞作为对照，确定Vγ9Vδ2 T细胞可以作为CAR表达的平台。而CD8 跨膜结构域的CAR表达率较CD28有明显提升，另外利用Agilent xCELLigence RTCA对体外杀伤能力进行对比并检测了杀伤时细胞因子IFN-γ的释放，结果表明8t28Z也就是CD8结构域和CD28共刺激域的PSCA CAR T有更强的杀伤效力。
图2. ZOL增强了γδ CAR-T细胞对小鼠骨头内的前列腺癌细胞的清除
Anti-PSCA γδ 8t28Z CAR-T细胞不仅在体外有很高的杀伤效力，在体内前列腺癌骨转移小鼠模型中也展现了惊人的疗效，特别是在ZOL联合治疗组（60%的小鼠骨肿瘤完全消除），而没有ZOL联合治疗的小鼠在终点时只有28.6%的小鼠肿瘤完全消除。
这篇文章是第一个将γδ T细胞应用到前列腺癌骨转移小鼠治疗中的研究，并为我们证明了来自外周血的Vγ9Vδ2 T细胞（外周血主要的γδ T细胞亚群）适合于CAR表达的应用。Vγ9Vδ2 CAR-T细胞极大改善骨转移瘤的骨损伤，同时联合ZOL增强了骨保护机制，并提供双重激活途径增强疗效。因此有望将其转化到临床治疗化疗和去势治疗失败的前列腺癌骨转移患者。
Agilent之于γδ T细胞疗法
安捷伦细胞分析事业部致力于细胞治疗整体方案的开发，文章中对于不同γδ CAR-T的体外杀伤检测应用的是Agilent xCELLigence RTCA，RTCA是基于阻抗的无标记检测，因此还可以用于多轮次的重复杀伤，模拟体内抗原的Rechallenge。还有智能化NovoCyte系列流式细胞仪，提供多达30个荧光通道的灵活配置，精确分析细胞表面marker的表达以及多因子的释放。因此RTCA和Novocyte检测平台的联合可以为细胞治疗药效研究提供全维度的数据检测。
参考文献
Reference
1. Godder, K. T., Henslee-Downey, P. J., Mehta, J., Park, B. S., Chiang, K. Y., Abhyankar, S., & Lamb, L. S. (2007). Long term disease-free survival in acute leukemia patients recovering with increased γδ T cells after partially mismatched related donor bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplantation, 39(12), 751-757. https://doi.org/10.1038/sj.bmt.1705650
2. Ma L, Feng Y and Zhou Z (2023) A close look at current gd T-cell immunotherapy. Front. Immunol. 14:1140623. doi: 10.3389/fimmu.2023.1140623
3. Frieling, J. S., Tordesillas, L., Bustos, X. E., Ramello, M. C., Bishop, R. T., Cianne, J. E., Snedal, S. A., Li, T., Lo, C. H., de la Iglesia, J., Roselli, E., Benzaïd, I., Wang, X., Kim, Y., Lynch, C. C., & Abate-Daga, D. (2023). γδ-Enriched CAR-T cell therapy for bone metastatic castrate-resistant prostate cancer. Science advances, 9(18), eadf0108. https://doi.org/10.1126/sciadv.adf0108
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