过表达慢病毒

目前很多课题研究都会使用到慢病毒载体，通过针对目的基因构建过表达慢病毒，转染到目的细胞或者动物体内，研究其目的基因上调对细胞或者动物某种通路或者疾病的影响。
一、实验操作步骤：
1. 根据目的基因相关信息（注：客户提供基因ID或者基因序列）获取目的基因；
2. 选择符合实验要求的载体；
3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体；
4. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内毒素）的重组质粒；
5. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装并收集上清液；
6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；
7. 使用病毒液感染293T细胞，测定病毒滴度。
二、客户须知
1. 提供与本实验相关的详细资料（含课题基本情况及预期达到的目的等）；
2. 提供目的基因RefSeq ID；
3. 目的基因的表达克隆及相关信息；
4. 目的基因抗体及抗体使用说明书（如委托本中心的实验中涉及Western Blot实验）；
5. 目的细胞及相关说明（如委托本中心的实验中涉及目的细胞的培养）。
三、结果提供
1. 目的基因慢病毒质粒测序文件,测序图谱,质粒结构图,序列比对文件；
2. 目的基因慢病毒质粒构建、包装、纯化实验报告；
3. 1ml过表达病毒，并赠送阴性对照（病毒滴度 ≥1 X 108 TU/ml），同时提供病毒滴度检测报告；
4. 功能检测的相关实验报告。
注：报告未能详尽的实验相关数据，本中心在能力范围内予以补充。