稳定细胞株构建

稳定表达细胞株（稳转细胞株）指能持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达的细胞株。在基因功能的研究中，稳定表达细胞株则弥补了瞬时感染（或转染）一些功能实验中由于外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。构建稳定细胞株的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选混合阳性克隆（针对转染效率较高的细胞株）；有些细胞株转染效率比较低，混合阳性克隆蛋白表达或降低不均一不明显的情况下，还需在阳性混合克隆的基础上，得到单细胞长出的阳性单克隆，继而得到稳定转染细胞株。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)等。

舒桐生物科技拥有丰富的稳定细胞株构建经验。根据不同类型和转染效率的细胞以及需要表达的外源基因的大小，针对性地选择病毒感染或者转座子介导的质粒稳定转染的方法进行稳定表达细胞株构建。

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转座子（Transposon）介导稳定细胞株构建

转座子（Transposon）是移动的遗传信息元件，通过“剪切和粘帖”机制可实现目的DNA片段在载体和染色体之间高效转移。鼓润转座子系统包含了转座载体和超级转座酶表达载体。超级转座酶通过识别转座载体中两段特异的末端反向重复(ITRs)序列，将ITRs之间的序列切割下来，然后插入到染色体基因组的TTAA位点。

舒桐转座子系统的活性非常强，可高效地将PB载体中ITRs之间的目的DNA片段插入到靶基因组中。并且插入片段的长度非常大，非常适合大片段DNA和长基因的转基因应用。鼓润对转座酶经基因工程优化获得了活性更高的超级转座酶，进一步提升了目的DNA整合到宿主基因组中的效率。

转座子介导的稳定细胞株构建流程

1. 获得目的基因序列或能转录shRNA的DNA序列；
2. 构建目的表达载体；
3. 目的表达载体与转座子载体共转染靶细胞；
4. 利用抗生素筛选，得到稳定混合阳性多克隆稳转细胞株或单克隆细胞株（可选）；
5. 基因表达检测。

转座子介导的稳定细胞株构建优势

舒桐生物科技长期致力于Transposon系统的开发和优化，已在多种不同的细胞中成功稳定整合大片段目的基因。该系统具有如下应用优势：

1. Transposon介导转基因的载量大，高达200 kb长目的DNA的转基因；
2. 稳定插入整合到基因组上的效率高；
3. 安全，是一种非病毒转基因系统；
4. 可逆，整合到基因组上后还可以实现切除下来；
5. 和基因组编辑技术配合实现无痕编辑。

服务说明

1. 客户提供目的基因的序列，如果提供模板，请告知载体、酶切稳点等信息；
2. 目的蛋白的功能验证另外收费。

稳转细胞株交付材料

1. 稳转细胞株冻存细胞2支；
2. 实验测序数据；
3. 详细的实验结题报告（包括实验步骤，引物信息，实验结果等）