快速导航
首页
资讯类
资讯
专题
会议
锐客
标准
方法
行业类
快检
食品
环境
材料
化工
生物
制药
临床
仪器类
仪器
Lab
新品
导购
电商
互动类
直播
x
价格:
8000
单克隆抗体制备服务
产品属性
品牌
研谨生物
产地
上海
型号
单克隆抗体制备服务
关注度
0
信息完整度
关闭
产地:上海; 品牌:研谨生物
上海研谨生物科技有限公司
其他会员
进入商铺
全部产品
推荐产品
多克隆抗体制备服务
产品描述
提供商
:
上海研谨
生物
服务名称
:
单克隆抗体制备服务
规格
:
实验服务
价格:
8000
元
收费标准
/
服务周期
/
提供结果
:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
更多实验技术服务请浏览网站其他内容
,
或来电详询
!
单克隆抗体
(MAb)
是针专
- -
的抗原决定簇产生的抗体,单克隆技术又名杂交瘤技术起源于
1975
年,由
G. KOhler
和
Milstein
创立。主要原理是利用产生抗体的
B
细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。
杂交瘤技术制备单克隆抗是针对体的主要步骤包括
:
(1 )
抗原制备,
(2)
免疫动物
,
(3)
免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备
,
(4)
细胞融合
;
(5)
杂交瘤细胞的选择培养,
(6)
杂交瘤细胞的筛选
;
(7)
杂交瘤细胞的克隆化
;
(8)
单克隆抗体的检定
;
(9)
分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立
:
(10)
单克隆抗体的大量制备。
单克隆抗体的制备过程
:
1
、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏
B
淋巴细胞的过程。一般选用
6- 8
周龄雌性
Balb/c
小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应
B
淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏
B
淋巴细胞。
2
、细胞融合采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合
,
并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
3
、选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用
HAT
选择性培养基。 在
HAT
培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成
DNA
而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在
HAT
培养基中存活和增殖。
4
、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在
HAT
培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。
经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子后,及时进行冻存。
单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体
外培养法。
(1)
体内诱生法取
Balb/c
小鼠,首先腹腔注射
0. 5ml
液体石腊或降植烷进行预处理。
1-2
周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约
1-2
周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。
(2)
体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。近年来
,
各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗体的生产量。杂交瘤细胞融合后,要进行筛选后才能使用。杂交瘤细胞分为两次
:
一、筛选出杂交瘤细胞
;
二、 在初选的杂交瘤细胞中筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,这两次筛选的方法和原理各不相同。
上一篇:
流式细胞检测报价
下一篇:
ELISA试剂盒免费代检测服务
店铺
收藏
咨询留言
一键拨号