过表达细胞系服务

目的基因过表达是研究基因功能常用的手段之一。基因过表达稳定细胞系已经广泛应用于生物学研究，包括基因调控、蛋白质工程、重组抗体制备、药物研发等。将目的基因通过转染或病毒包装的方法，能够实现目的基因过表达的稳定细胞系。

孚博生物有多年丰富的经验可以在各种细胞类型上实现基因的过表达，甚至是难转染的细胞。我们可以根据客户的需要进行量身定做，在各种哺乳动物细胞中过表达各种基因。基于完善的基因过表达技术，孚博生物可将目的基因定点整合到基因组的高表达活性位点中，这些位点不仅安全而且基因表达量高，可以实现目的基因过表达，并能长期稳定遗传。我们的过表达细胞系服务，外源基因整合高效性不受基因片段大小影响，并可同时整合多个基因。

技术流程



载体构建- 将目的基因克隆入高效表达载体中。

转染或转导- 通过电转染、转染试剂（脂质体等）或病毒包装的方法将外源基因转染或转导入细胞。

筛选- 根据表达载体的筛选标记，优化最佳筛选药物浓度，进行阳性细胞克隆筛选，如嘌呤霉素、G418筛选等。

扩大培养- 挑取单克隆细胞，进行扩大培养。

目的基因表达检测- 通过PCR、qRT-PCR、Westernblot等方法，从DNA、mRNA、蛋白水平进行目的基因的表达检测。

稳定性验证- 所有过表达细胞系都经过了严格的测试和验证，其稳定性能保持25代以上，且保证均无支原体污染。

功能性验证- 对外源基因表达蛋白进行功能性检测。客户特定基因的过表达稳转细胞系，根据实际情况评估。GPCR过表达细胞株一般采用报告基因方法和（或）胞内钙流检测方法进行活性测定。对于离子通道过表达细胞株，我们可应用膜电位染料、手动膜片钳或Qpatch的方法进行测定。

 

技术优势

外源基因定点整合，非随机整合。

稳定遗传，细胞传代过程中，目的基因不会丢失。

外源基因整合高效性不受基因片段大小影响。

定点整合的位点为高表达位点，使外源基因高效表达。