用二条引物进行PCR扩增,结果如右图所示。用LP和RP扩不出条带,而用RP和LBb 1能扩出条带的为突变体纯合株。...
胺黑和丽春红 S 染色不影响蛋白质消化、从膜上提取肽段和随后的 RP-HPLC 肽段分析。2.用胺黑或丽春红 S 染膜。用胺黑染:(1)把硝酸纤维膜或 PVDF 膜浸在 0.1% 胺黑 10B 染色液中,保持 1~3 mm。(2)用水/乙酸/甲醇混合液快速冲洗几次膜,使之脱色。(3)用去离子水彻底冲洗脱色后的印迹膜,去除过量的乙酸。...
加入100 µL 内标溶液 (D5-Atrazine,1 µg/mL); 3. 加入10 mL乙腈,剧烈振摇; 4. 加入4 g无水MgSO4和1 g NaCl; 5. 马上涡旋混合,以防止MgSO4共聚物的生成; 6. 振摇30 s后,4300 r/min离心5 min; 7. 转移初提液1 mL至含有150 mg无水MgSO4的离心管中; 8....
三、S-羧甲基化蛋白质的回收(脱盐和浓缩)8.将 2%~3%(约 300ng 蛋白质)的总混合物上样到反相微孔层析柱中(50 mm X 1mm 内径 HPLC 系统)。在加人大量的蛋白质至 RP-HPLC 之前,用 2%~3% 的总样品(约 300ng) 做预实验,以确定样品能够从反相柱上回收。...
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