应用于核酸定量、基因表达验证、等位基因鉴别、SNP分型、病原体和病毒检测、多重PCR。优缺点: 探针法的鉴别能力远远大于DNA结合染料法,因为它们只与目的产物结合,从不与引物二聚体或其他非特异产物结合,缺点是它的合成价格高。...
除此之外我们还可以对 PCR 产物或样品进行定性分析:例如利用熔解曲线分析识别扩增产物和引物二聚体,以区分非特异扩增;利用特异性探针进行基因型分析及 SNP 检测等。目前实时荧光 PCR 技术已经被广泛应用于基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域。其中最主要的应用集中在以下几个方面:DNA 或 RNA 的绝对定量分析。...
从临床优生学角度分析具体工作包括在母亲妊娠期间对母亲及胎儿进行遗传学检查尽量排除常见的遗传性疾病个体的出生,另外在妊娠期检查母亲是否患有某些易引起胎儿畸形的传染性疾病如弓型虫、风疹病毒、衣原体等感染。以往对遗传性疾病的检测主要使用染色体分析法,而临床绝大部分遗传性疾病是基因病而不是染色体病,染色体发析法不能检出的。...
一步法qRT-PCR的优点包括:防止污染:闭管系统可防止在RT和PCR阶段引入污染物便捷:移液步骤减少,最大程度缩短操作时间,非常适合高通量样本筛选灵敏度:由于生成的所有第一链cDNA均被用于实时荧光定量PCR扩增,因此一步法反应的灵敏度高于两步法反应一步法qRT-PCR的缺点包括:形成引物二聚体的风险更高:一步法反应中存在的正向和反向基因特异性引物,极易在42–50°C逆转录条件下形成二聚体。...
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