cDNA文库构建可以:(1)用于分离全长基因进而开展基因功能研究;(2)筛选目的基因并直接用于表达;(3)提供构建分子标记连锁图谱的所用探针。实验方法原理cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。...
最后将获得的cDNA文库与AD载体共转化进酵母细胞中即可以完成酵母cDNA文库的构建了。文库构建好后,可以通过滴度鉴定文库库容量,PCR和测序鉴定文库质量。此外,需要补充的是,通过二链与pGADT7共转酵母获得的酵母AD文库,进行筛库时只能使用mating方法。如果在转酵母之前,先将cDNA文库重组到AD载体上再通过大肠杆菌扩增,就可以获得含有cDNA的文库质粒和大肠杆菌文库菌液了。...
总结:C文库构建的简单流程为: RNA-mRNA-cDNA单一链的合成-cDNA单二链的合成-加接头-与载体连接-体外包装-转染-筛选文库(见总RNA的提取(试剂盒法、氯化锂法和蛋白酶-热酚法)、mRNA的提取及纯化(磁珠法和亲和柱层析法)、cDNA文库构建技术-cDNA链的反转合成)...
含 1×105个克隆的基因文库相当覆盖了 5倍的基因组,在片段随机分布时,从文库中找到任一序列的概率不低于0.99。 (二)cDNA文库 1、概念 cDNA文库:利用某种生物的总mRNA合成cDNA,再将这些cDNA与载体连接,转入细菌细胞中进行保存和扩增。 2、cDNA文库的特点 (1)不含内含子序列。...
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