ASTM F2944-12
自动菌落形成单位(CFU) 检验标准试验方法.用于培养中列举和表征细胞和菌落的影像采集与分析方法

Standard Test Method for Automated Colony Forming Unit (CFU) Assaysmdash;Image Acquisition and Analysis Method for Enumerating and Characterizing Cells and Colonies in Culture

被代替

标准号

ASTM F2944-12

发布

2012年

发布单位

美国材料与试验协会

替代标准

ASTM F2944-20

当前最新

ASTM F2944-20

 

 

适用范围

依赖于观察者的手动测定8212；基于依赖于观察者的标准或判断对细胞和 CFU 培养物进行手动定量是一项极其繁琐且耗时的任务，并且受到用户偏差的显着影响。为了保持数据采集的一致性，利用基于细胞和集落的测定的药理学和药物发现和开发研究通常需要单个观察者对数百个甚至可能数千个培养物中的细胞和集落进行计数。由于观察者疲劳，量化的准确性和再现性都会受到严重影响 (5)。当采用多个观察者时，观察者疲劳会减轻，但由于观察者偏差以及观察者内部和观察者之间的显着差异，细胞和集落计数的准确性和再现性仍然受到显着影响 (4, 13)。使用定量自动图像分析提供集落数量以及每个集落中的细胞数量的数据。这些数据还可用于计算每个集落的平均细胞数。通过手工计数结合细胞数量（例如 DNA 或线粒体）测定来定量集落的传统方法仍然是一种可行的方法，可用于计算每个集落的平均细胞数。这些传统方法的优点是目前劳动密集度较低且技术要求较低 (8, 9)。然而，传统的测定不提供集落水平信息（例如变异和偏差），也不提供从平均集落大小的计算中排除不属于集落一部分的细胞的方法。因此，当样品中大量细胞与集落形成无关时，从这些替代方法获得的每个集落平均细胞数的测量结果可能会有所不同。通过采用最先进的图像采集、处理和分析硬件和软件，实现了准确、精确、稳健和自动化的分析系统。应用领域8212；细胞和集落计数（CFU 测定）在基于细胞的再生医学和细胞治疗的制造、质量保证/控制 (QA/QC) 以及产品安全和效力释放标准的开发中变得尤为重要。 2006 年，美国食品和药物管理局 (FDA) 发布了一份指导文件，预示了菌落测定在为该行业的上述产品开发步骤建立审核跟踪方面的重要性 (10)。为了证实该文件，FDA 于 2009 年发布了另一份指导文件，提出集落测定对于再生医学和治疗应用中胎盘和脐带血干细胞的功能效力的潜在意义 (11)。由于细胞源验证和 QA/QC 约占细胞疗法制造成本的 50% (12)，因此开发一种精确、稳健且经济高效的细胞和集落计数方法对于该行业的可持续发展和增长至关重要。集落形成单位检测自动分析的广泛应用领域包括： 通过将生物潜力和功能效力与 CFU 形成相关联来表征细胞来源。表征加工步骤或生物或物理操作（例如刺激）对细胞或集落形成的影响。使用特定的荧光和非荧光（分化）标记来表征细胞和集落。外推较大样本的生物效力（例如分化、增殖等）......

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