蛋白质定性检测

      主要用于鉴定单一组分样品或混合样品中的蛋白质种类。样品形式可以是从组织或细胞中提取的蛋白混合物、电泳分离后的单一条带、免疫沉淀富集的蛋白等。蛋白样品经胰酶消化后，使用质谱进行鉴定。既可以使用液质联用质谱平台，也可以使用MALDI-TOF/TOF质谱平台。液质联用质谱平台更适合用于复杂的样品，其分辨率与准确性更高。

技术原理
液质联用的串联质谱法（Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS）鉴定蛋白是蛋白质组学研究的首选平台，特异性强，可靠性高。蛋白经胰酶消化形成的肽段先进入液相色谱进行分离，再进行质谱检测。一级质谱检测多肽分子的大小，然后再将肽段打碎，形成一系列离子，即N端离子系列（ b系列）和 C端离子系列（ y系列），进一步检测碎片离子的大小，即二级质谱。将质谱数据与蛋白数据库进行比对，获得肽段的序列，特定的多肽序列对应着特定的蛋白，从而鉴定出待检测蛋白。如下图所示：

质谱鉴定蛋白原理图

技术优势
1、采用真正的纳流液相系统，具有更高的灵敏度。
2、串联质谱，提供序列信息，蛋白质鉴定可靠性高。
3、采用 Q Exactive LC-MS/MS系统，具有极高的分辨率，尤其适用于复杂样品的鉴定。

技术路线
单个蛋白鉴定
1、用于鉴定纯化的单个蛋白的溶液或粉末，或经过 SDS-PAGE的单个条带或二维电泳的单个点。
2、蛋白酶解成多肽。
3、液质联用质谱检测：液相分离多肽，离子化的多肽进入质谱，母离子检测，母离子裂解成一系列子离子，子离子检测。
4、数据库检索。
5、数据审核，输出检测报告。

全蛋白质组及蛋白混合物的鉴定
用于鉴定含有多种蛋白质的混合物，包括全蛋白提取物等。根据样品的复杂程度采取不同的策略分离后再进行质谱鉴定。对于全蛋白质组，可以先用SDS-PAGE或者液相色谱分级产生15～20个组分，酶切消化成肽段，再使用液质联用质谱鉴定。也可将蛋白混合物直接消化成肽段后，用液相色谱分成15～20个组分，再依次使用液质联用质谱仪鉴定。对于IP实验富集的蛋白样品，可以煮沸后用SDS-PAGE分离成5～10个组分，从胶里面回收消化后的多肽，进行液质联用质谱鉴定。