赛业生物采用第1代重组腺病毒包装系统制备腺病毒颗粒。该包装系统包含一个腺病毒载体和一株包装细胞株。

1、一个腺病毒载体：缺失了E1和E3区域的腺病毒基因组序列被克隆到质粒上。
2、一株包装细胞株：E1基因片段被整合到293细胞。

野生型腺病毒基因组是一条约36kb的线性双链DNA（dsDNA）分子。基因组的两个末端被称为Inverted Terminal Repeat（ITR），末端之间含有腺病毒DNA复制所需基因。在病毒DNA复制周期早期表达的基因，称为早期基因，主要有4个，按表达先后顺序依次是E1、E2、E3、E4。在病毒DNA复制周期晚期表达的基因，称为晚期基因，主要有5个，按表达先后顺序依次为L1、L2、L3、L4、L5。为了制备出自我失活的重组腺病毒，E1基因会被删除，使重组腺病毒成为一种安全的基因运输工具。为了增加包装能力，E3基因也同时被删除，因为E3基因产物会提高宿主的免疫反应，而且对病毒生产不重要。缺失了E1和E3基因的腺病毒基因组序列被克隆到质粒上构建成腺病毒载体。E1基因片段被整合到293细胞基因组中，包装病毒颗粒时，Pacl消化的腺病毒载体转染到表达E1基因的293细胞。E1基因激活了其他早期基因和晚期基因的表达，这些基因表达产物和Pacl消化的质粒DNA组装成病毒颗粒。

腺病毒生产

生产携带目的基因的重组腺病毒颗粒的过程如下示意图：

将环形腺病毒载体通过PacI位点酶切后获得两末端是ITR序列的线性双链DNA，再转染线性化DNA到包装细胞。线性化双链DNA分饰两个角色，既是病毒基因组，又是病毒蛋白表达所参照的基因模板序列。病毒蛋白与基因组组装成病毒颗粒，病毒颗粒在细胞内成熟后，会使得细胞破裂，从而使病毒颗粒释放到培养液中。收集细胞和培养液，然后反复冻融细胞和培养液的混合物。离心收集上清，获得粗病毒。此时的粗病毒量通常不会很高。一般会将粗病毒感染更多的包装细胞，以扩增病毒量。病毒扩增后，只收集细胞。再反复冻融细胞，离心收集上清，即可获得转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的病毒颗粒，可以利用CsCl2超速离心进一步去除杂质，从而获得纯度更高的病毒颗粒。

质量控制

我们对每一批病毒都进行滴度检测，严格控制质量，让您百分百放心。针对转导细胞级别的病毒颗粒，我们会采用TCID50滴度检测法。针对注射动物级别的病毒颗粒，我们则采用OD260滴度检测法。

服务明细

腺病毒载体

（一）基因表达腺病毒载体