前言

近年来，动物制品中的 兽药严重超标，不仅对人体 产生急性或慢性中毒作用， 引起致病原耐药性显著增 强，还可通过各种环境和食 物链，间接对人体的生命财 产安全造成危害。为此，当 前做好动物源性食品中多 种兽药残留的检测刻不容 缓。硝基咪唑类药物是一 类常用抗菌类药物，常见的有甲硝唑、洛硝哒唑、地美硝唑、替硝唑、羟甲基甲 硝咪唑等，使用此类药物对动物体重还具有增加作用，因此在畜禽养殖中被广泛 违法使用。有研究表明，硝基咪唑类药物和其代谢物具有致突变和致癌性，禽类 肉和蛋制品中的硝基咪唑类药物残留对消费者健康构成直接威胁。 本实验参考《GB/T 21318-2007 动物源食品中硝基咪唑残留量检验方法》，利 用莱伯泰科 MVP 全自动高通量真空平行浓缩仪进行浓缩，GPC 1000 全自动凝胶 净化系统进行净化，SPE 1000 全自动固相萃取系统进行富集，采用 LC-MS/MS 检测样品，建立了一套检测肉制品中的硝基咪唑前处理方案，此方案的回收率及 平行性良好，适合动物源食品 中硝基咪唑残留量的检测。

一、仪器与试剂 

GPC 1000 全自动凝胶净化系统（莱伯泰科）； 

MVP 全自动高通量真空平行浓缩仪（莱伯泰科）； 

SPE 1000 全自动固相萃取系统（莱伯泰科）； 

液质联用仪：SCIEX Exion LC™液相系统+ Triple Quad™ 4500 质谱系统 （SCIEX 公司） 

10 种硝基咪唑标准使用液：10μg/mL，溶剂体系为甲醇； 

甲醇、甲酸、乙酸乙酯、丙酮、环己烷（色谱纯，Fisher 公司）； 

氯化钠、无水硫酸钠、硅藻土（分析纯，国药集团）； 

C18 固相萃取柱：1000mg/6mL（莱伯泰科）

 

二、实验过程 

1、样品提取 

    精密称取市售羊肉制品 20g，加入 10g 硅藻土，混匀，再加入 5mL 饱和氯化 钠水溶液和 70mL 甲醇-丙酮（3+1），均质 3 min，后续在 10000r/min 条件下离心 2min，收集上清液，样品残渣用 50mL 甲醇-丙酮（3+1）重复提取两次，合并提 取液

    将提取液置于 MVP 全自动高通量真空平行浓缩仪上按温度 38℃、转速 150rpm、真空度 120mbar 浓缩至仅剩水相，加入 50mL 饱和氯化钠水溶液和 25mL 乙酸乙酯，振摇 3min，分层后收集乙酸乙酯相，水相再用 20mL 乙酸乙酯重复提 取两次，合并乙酸乙酯提取液，经无水硫酸钠除水，于 MVP 全自动高通量真空平 行浓缩仪上按温度 36℃、转速 150rpm、真空度 250mbar 浓缩近干，用乙酸乙酯 -环己烷（1+1）定容至 5mL，待净化。 

2、凝胶净化 

凝胶净化柱采用 Bio-Beads SX3，20×300 mm；流动相采用乙酸乙酯-环己烷 （1+1）；使用 GPC 1000 全自动凝胶净化系统按照图 1 方法对过程 1 中提取液进 行净化，收集净化液，于 MVP 全自动高通量真空平行浓缩仪按按温度 36℃、转 速 150rpm、真空度 250mbar 浓缩近干，用甲醇定容至 5mL，待后续处理

3、固相萃取 

将过程 2 中的净化液加入 SPE 1000 全自动固相萃取系统按照图 2 方法进行 固相萃取富集，洗脱液加入 MVP 全自动高通量真空平行浓缩仪按温度 38℃、转 速 150rpm、真空度 120mbar 浓缩近干，用甲醇定容至 1mL，经 0.22μm 滤膜过 滤后，待上机检测。

4、加标回收率测定 

按照前述的方法准备样品，在样品中分别按 1ng/g、4ng/g 的标品浓度加入一 定体积的 10 种硝基咪唑标准使用液，最后得到加标样品待上机检测。 

5、标曲配制 

制备 6 份阴性样品溶液，按照最终定容浓度 0、10、20、50、100、500ng/mL 分别加入 10 种硝基咪唑标准使用液，上机检测。

三、LC-MS/MS 测定条件 

a）色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）； 

b）柱温：40℃； 

c）进样量：5μL； 

d）流动相： A:0.1%甲酸水溶液，

B: 甲醇（梯度洗脱程序见表 1）； 

e）流速：0.40mL/min； 

f）离子源参数： IS 电压：5500V； 气帘气 CUR: 30 psi；雾化气 GS1: 50 psi ； 辅助气 GS2: 60 psi；离子源温度 TEM: 600 ℃ ；碰撞气 CAD: 9 psi；5 

g）检测方式：正离子模式，多反应监测（MRM）。

结果见文件