如何利用合相色谱法鉴别香草提取物

为降低香草提取的成本，一些制造商使用合成或人工香料替代更为昂贵的纯香草。在许多情况下，这些便宜的替代品包括合成成分，例如乙基香草醛。但某些提取物含有潜在危害性掺杂物，其中包括香豆素，即零陵香豆散发出的香味。这种特殊的掺杂物是一种可疑致癌物，可以与血液稀释药物发生反应。在美国，香豆素已被禁止用做食品成分，美国食品药品监督管理局(2009)针对近年来其在香草提取物中的滥用发出了消费者警告。

现在已开发出大量的反相液相色谱(RPLC)方法用于分析，以确定香草提取物中的真实成分。这些方法能够筛选出合成和人工香料，以及香草醛的次生成分，后者是香草豆荚正宗提取物的标志物。这些方法可实现高通量分析，正交分离可依据不同的选择性带来便利。

使用含有来自香草豆荚(香草醛，对羟基苯甲酸，对羟基苯甲醛和香草酸)的香味成分，以及合成香草醛(乙基香草醛)和禁用掺杂物香豆素的标准溶液进行方法开发。标准溶液由异丙醇制备。实验采用ACQUITY UPC2™ BEH 2- EP 130Å 3.0 x 100 mm，1.7 μm色谱柱开发出一个2.5 min的方法，如图1所示。UV方法条件中使用了20 mM柠檬酸的甲醇溶液作为改性剂/添加剂，用以改善酸性成分的峰形。

实验针对UV方法的重复性(表1)和线性(表2)进行了评估。配制0.250-500μg/mL的标准溶液。在12.5­g/mL浓度下，保留时间的重复性(n=5)≤0.10 %RSD，相同标准溶液进样的峰面积重复性为<1.80 %RSD。线性范围涵盖两至三个数量级，与分析物相关，R2 > 0.999(表2)。被测分析物的定量限(LOQ)的范围在0.250至1.25 μg/mL之间。如果在分析香草提取物时需要稀释样品，使用UV法可满足此特定分析的灵敏度要求。

为检测掺杂物，将此方法用于筛选来自不同地理区域的香草提取物(包括标记为“纯品”和“仿制品”的样品)(图3)。使用乙醇对香草提取物进行十倍稀释(样品混溶)，并在分析前过滤。来自美国的香草提取物仿制品(A)的分析结果显示：同时存在有合成香草醛(乙基香草醛)和香草醛。由于此样品中不存在其他的天然香料成分，说明香草醛极有可能是合成的。在美国之外购得的已知香草提取物的伪造品(B)含有掺杂的香豆素以及香草醛，由于不含次生香草成分，因此也很可能来源于合成。最后，标记为“纯品”的香草提取物(C)的分析结果确认其为真品。此样品中同时鉴定出了香草醛和次生天然香料成分，并进行了定量分析。此外，香草醛和对羟基苯甲醛的比值为14.9，位于纯正香草提取物之前的指示范围内(表3)2。