分光光度计工作参数条件的选择和操作注意事项

一、工作参数条件的选择

(1) 测量波长 在定量分析中，为了提高测定的灵敏度，入射光的波长应选择被测物的最大吸收波长λmax，如果λmax有干扰，可选择另一条灵敏度稍低、但能避免干扰的谱线，所以，适当选择入射光的波长，不仅能提高测定的灵敏度，还能提高测定的准确度。

(2) 狭缝宽度 狭缝宽度过大，入射光的单色性差；狭缝宽度太小，入射光的光强减弱。狭缝宽度过大或过小均会造成灵敏度降低，最佳选择是产生最小误差情况下的最大狭缝。一般选用仪器的狭缝宽度应小于待测样品吸收带的半宽度，否则测得的吸光度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。

(3) 控制适当的吸光度范围 可通过控制被测物浓度或改变吸收池厚度来实现吸光度合理的范围，以尽量减小测量误差。一般吸光度尽量控制在0．1～0．8范围。

(4) 空白溶液的选择 空白溶液是用来调节吸光度测量工作零点即A=0，T=100％的溶液，以消除溶液中其它基体组分以及吸收池和溶剂对入射光的反射和吸收所带来的误差。根据情况不同，常用空白溶液有如下几种选择。

① 溶剂空白 当溶液中只有待测组分在测定波长下有吸收，而其它组分无吸收时，可用纯溶剂作空白。

② 试剂空白 如果显色剂或其它试剂有吸收，而待测试样溶液无吸收，则用不加待测组分的其它试剂作空白。

③试样空白 如果试样基体有吸收，而显色剂或其它试剂无吸收，则用不加显色剂的试样溶液作空白。

二、操作注意事项

开机前应检查确定样品室与池架上没有放置任何物品，以免因光束被阻挡而无法通过光源能量检查和波长检查。

分光光度计使用前要预热30min左右，如果仪器没有经过指定的预热时间，仪器可能会达不到指标要求。

在使用过程中，如需进行T=100％ (A=0) 校正时，要盖好样品室盖，以避免外界光对校正测定的干扰。

为了防止光电管疲劳，采用光电管作检测器的仪器在不测量时尽量将比色皿暗箱盖打开，使光路切断，以延长其使用寿命。实验后尽快关闭仪器，保护氘灯或钨灯的寿命。并注意清洁，防止腐蚀。