扫描电镜样品制备程序
一、固定:戊二醛-锇酸双固定法
1.2.5%戊二醛(试剂1)固定4小时(或者过夜)
2.0.1M 磷酸缓冲液(试剂2)清洗3次,每次15-30分钟
3.1%锇酸(试剂3)固定2-4小时 4.0.1M 磷酸缓冲液(试剂2)清洗3次,每次15分钟
二、脱水:乙醇系列
1.30%乙醇 15-20分钟
2.50%乙醇 15-20分钟
3.70%乙醇 15-20分钟
4.80%乙醇 15-20分钟
5.90%乙醇 15-20分钟
6.95%乙醇 15-20分钟
7.100%乙醇 两次 每次15-20分钟
三、置换: 乙酸异戊酯2次,每次15分钟(或过夜)。
四、干燥: 临界点干燥
五、离子溅射金
六、扫描电镜观察
附注:试剂配置 试剂1:2.5%戊二醛 取0.2M磷酸氢二钠40.5mL(A液),0.2M磷酸二氢钠9.5mL(B液),混合均匀(即0.2M磷酸盐缓冲液 pH7.4),加入10mL浓度为25%的戊二醛,用超纯水稀释至100mL。 试剂2:0.1M 磷酸缓冲液 (pH 7.4) A液:0.2M磷酸氢二钠 称取3.561g Na2HPO4.2H2O(或者5.365g Na2HPO4.7H2O); 或7.164g Na2HPO4.12H2O),溶于100mL双蒸水中。 B液:0.2M磷酸二氢钠 称取2.760g NaH2PO4.H2O(或者3.121g NaH2PO4.2H2O),溶于100mL双蒸水中。 量取A液36.0mL, B液14.0mL,混合均匀后用双蒸水稀释至100mL,得0.1M 磷酸缓冲液(pH 7.4)。 试剂3:1%锇酸 将2%的锇酸溶液与0.1M磷酸盐缓冲溶液(pH 7.4)等体积混合,得1%锇酸。
注意:该操作在通风橱中进行。